人組織型激肽釋放酶6在胃癌中的表達(dá)及其臨床應(yīng)用研究.pdf

1、【目的】胃癌是我國最為常見的惡性腫瘤之一，由于其起病隱匿，早期難以發(fā)現(xiàn)，晚期治療效果差，嚴(yán)重威脅著人類健康。因此尋找有關(guān)胃癌早期診斷的新參考指標(biāo)，提高診治效果，是目前胃癌研究中至關(guān)重要的課題。人組織型激肽釋放酶基因家族(KLKs)是近年新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤相關(guān)的絲氨酸蛋白酶家族，KLK6基因是該家族成員之一，其編碼的蛋白一人組織型激肽釋放酶6（hK6）是由223個(gè)氨基酸組成的絲氨酸蛋白酶，具有胰蛋白酶樣活性，與胃癌關(guān)系密切。本課題首先采用免疫

2、組化SP法檢測(cè)hK6在胃癌組織中的表達(dá)情況，并探討hK6在胃癌組織中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系。然后通過建立雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)胃癌患者血清中hK6的含量，探討血清hK6作為胃癌腫瘤標(biāo)記物臨床應(yīng)用的可行性。
　　 【方法】1、通過免疫組化SP法檢測(cè)120例胃癌、45例胃潰瘍和41例正常胃黏膜組織中hK6蛋白的表達(dá)情況，并進(jìn)一步分析hK6的表達(dá)與胃癌患者的性別、年齡、原發(fā)腫瘤大小、組織分化程度、原發(fā)部位、浸潤深度、

3、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討其臨床意義。
　　 2、建立定量測(cè)定人血清中hK6的雙抗體夾心ELISA方法，優(yōu)化ELISA方法的最佳條件，運(yùn)用棋盤滴定法確定包被抗體和酶標(biāo)記抗體的濃度，并用建立的ELISA方法檢測(cè)146例不同臨床分期胃癌患者、50例胃潰瘍患者和46例健康體檢者血清hK6的含量，并和CEA進(jìn)行對(duì)比分析，探討其作為胃癌血清腫瘤標(biāo)記物臨床應(yīng)用的可行性。
　　 【結(jié)果】1、hK6主要表達(dá)于胃癌

4、細(xì)胞的胞漿，在胃癌組織中陽性表達(dá)率為69.17％(83/120)，在胃潰瘍組織中的陽性表達(dá)率為31.11％(14/45)，在正常胃黏膜組織中的陽性表達(dá)率為19.51％(8/41)，胃癌中hK6表達(dá)的陽性率高于胃潰瘍及正常胃黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。在胃潰瘍與正常胃黏膜組織的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。隨胃癌浸潤深度的增加、TNM分期的升高及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，hK6的表達(dá)逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05、P

5、＜0.01)。但hK6的表達(dá)與胃癌患者的性別、年齡、原發(fā)腫瘤大小、組織分化程度以及腫瘤的原發(fā)部位等無相關(guān)性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、雙抗體夾心ELISA方法包被抗體的最適濃度為5μg/mL，酶標(biāo)記抗體的最佳稀釋比例為1:2000。成功建立了檢測(cè)胃癌患者血清中hK6濃度的ELISA方法，血清檢測(cè)結(jié)果顯示，胃癌患者血清中hK6的含量為（5.32±1.65）ng/mL，并且在晚期胃癌中的含量要高于早期胃癌(P＜0

6、.05)，胃潰瘍組為（3.51±1.02）ng/mL，健康對(duì)照組為（3.11±0.64）ng/mL，胃癌組與胃潰瘍組和健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。胃潰瘍組與健康對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。胃癌組hK6檢測(cè)的陽性率為61.64％(90/146)高于CEA檢測(cè)的陽性率41.10％(60/146)，兩者聯(lián)合檢測(cè)的陽性率76.71％(112/146)。
　　 【結(jié)論】免疫組化結(jié)果表明hK6與胃癌的發(fā)生