泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌與其主動(dòng)外排泵蛋白的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　了解臨床出現(xiàn)的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)19種常用抗菌藥物的耐藥情況;探討鮑曼不動(dòng)桿菌主動(dòng)外排泵在耐藥方面的作用、基因表達(dá);觀察外排泵抑制劑改變鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥的情況，指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，提高泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌治療效果，改善患者預(yù)后有重要意義，同時(shí)為研制開發(fā)新的抗菌藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1隨機(jī)收集非重復(fù)鮑曼不動(dòng)桿菌共142株，并測(cè)定19種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC):阿米卡星、慶大霉素、氨芐西林、

2、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、美羅培南等藥物。
　　2羰基氰氯苯腙(CCCP)泵抑制劑對(duì)菌株MIC的影響:抗生素二倍稀釋系列培養(yǎng)基中聯(lián)用泵抑制劑，同時(shí)制備僅含泵抑制劑的培養(yǎng)基作為生長對(duì)照。比較應(yīng)用CCCP泵抑制劑前后MIC值的變化，以加入泵抑制劑后MIC值比不加泵抑制劑降低4倍或以上作為外排泵表型陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)。
　　3對(duì)外排泵陽性株進(jìn)行外排泵蛋白基因的檢測(cè)和

3、分析:提取外排泵表型陽性株DNA，用PCR擴(kuò)增主動(dòng)外排系統(tǒng)調(diào)控基因并測(cè)序，擴(kuò)增產(chǎn)物以1.5％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，凝膠成像分析系統(tǒng)對(duì)電泳帶進(jìn)行照相和灰度掃描。
　　4用WHONET統(tǒng)計(jì)軟件和SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理
　　結(jié)果：
　　1142株臨床鮑曼不動(dòng)桿菌分離菌株的主要來源分別是是痰液(72.6％)、分泌物(11.3)，而鮑曼不動(dòng)桿菌菌株高發(fā)于ICU(40.8％)、呼吸內(nèi)科(14.8％)。
　　2142株臨

4、床鮑曼不動(dòng)桿菌分離菌株對(duì)19藥物敏感測(cè)定結(jié)果顯示，對(duì)多粘菌素B的敏感率100％，四環(huán)素的耐藥率最高94.5％，對(duì)諾氟沙星、慶大霉素、頭孢噻肟、氨芐西林耐藥率達(dá)90％以上，亞胺培南和美羅培南耐藥率分別為34.5％、36.6％。共篩選出多重耐藥及泛耐藥菌96株。
　　3篩選出的96株多重耐藥及泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在加入CCCP前后，慶大霉素耐藥率降低65.63％，耐藥菌株數(shù)減少63株，四環(huán)素、諾氟沙星、頭孢噻肟MIC值降低4倍及以上分別

5、有32株、41株、29株。對(duì)四種抗生素MIC值均降低4倍及以上34株。
　　4從34株鮑曼不動(dòng)桿菌檢測(cè)到adeB、adeR、adeS、adeJ、adeE、abeM基因分別有33株、32株、33株、33株、0株、33株，檢出率分別為97.06％、94.12％、97.06％、97.06％、0.00％、97.06％。
　　5對(duì)adeB、adeR、adeS、adeJ、abeM基因進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果顯示與Genebank中參考菌株序列同源

6、性為100％，未發(fā)現(xiàn)基因變異現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1臨床鮑曼不動(dòng)桿菌分離菌株對(duì)臨床多種常用的抗菌藥物存在普遍耐藥。
　　2對(duì)篩選的96株多重耐藥及泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行CCCP處理后，34株(35.42％)對(duì)最耐藥的四種抗生素的MIC值均降低4倍及以上。
　　3從34株可能由于外排泵的存在而產(chǎn)生耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌檢出adeB、adeR、adeS、adeJ、abeM。
　　4耐藥基因adeB、adeR、ad