BMSC構(gòu)建組織工程骨治療家兔橈骨骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立一套體外分離培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的方法，觀察骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)和掌握其生長(zhǎng)規(guī)律，檢測(cè)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞同骨基質(zhì)明膠以及聚乳酸-聚乙醇酸的細(xì)胞相容性。在家兔體內(nèi)構(gòu)建組織工程化骨，移植進(jìn)行肌袋實(shí)驗(yàn)，并修復(fù)家兔自體橈骨骨缺損模型，觀察成骨情況、過(guò)程，研究此種實(shí)驗(yàn)方法的可行性和有效性，以為臨床治療骨缺損提供一種可行的思路，探索一種可行的方法。 方法: (1)取幼兔長(zhǎng)骨骨髓，應(yīng)用密度梯度離心法分離培養(yǎng)家兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，分別

2、進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng)，觀察各代細(xì)胞生長(zhǎng)特性和生長(zhǎng)曲線，分析各種爬片染色，探討骨髓基質(zhì)干細(xì)胞作為骨組織工程種子細(xì)胞的可行性。 (2)將家兔髂骨、四肢長(zhǎng)骨干骺端經(jīng)過(guò)脫脂、脫鈣、去蛋白處理獲得骨基質(zhì)明膠，制備孔徑為150～300μm，孔隙率為90％的PLGA，并將二者與BMP相復(fù)合，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和材料體外聯(lián)合培養(yǎng)，離體構(gòu)建組織工程化骨，通過(guò)組織染色、電鏡觀察了解骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在材料上的黏附、生長(zhǎng)情況。并在體內(nèi)構(gòu)建

3、組織工程化骨，通過(guò)組織學(xué)觀察了解組織工程化骨形成情況。 (3)建立家兔橈骨缺損模型，分別以單純BMG-BMP和其與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)合物進(jìn)行修復(fù)，形成對(duì)比；以單純PLGA-BMP和其與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)合物進(jìn)行修復(fù)，形成對(duì)比。術(shù)后分別采用大體觀察、X線、組織學(xué)觀察以及定量超聲等方法對(duì)骨缺損修復(fù)情況進(jìn)行對(duì)比觀察。 結(jié)果: (1)用密度梯度離心法分離骨髓基質(zhì)干細(xì)胞是可行的。分離獲得的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)顯示，家兔骨

4、髓基質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)生長(zhǎng)穩(wěn)定增殖速度快，至少可傳代擴(kuò)增10次以上。 (2)實(shí)驗(yàn)所得的PLGA以及骨基質(zhì)明膠均為疏松多孔的網(wǎng)格樣類似于海綿的結(jié)構(gòu)，都具有一定的韌性和強(qiáng)度。把骨髓基質(zhì)干細(xì)胞接種于修剪成一定形狀的PLGA-BMP以及骨基質(zhì)明膠-BMP上，經(jīng)電鏡觀察可見(jiàn)細(xì)胞貼附于材料表面和孔隙內(nèi)并增殖。肌袋試驗(yàn)6周后，自體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞粘附的材料中有骨組織形成，單純材料組軟骨居多。 (3)在橈骨骨缺損模型修復(fù)中，單純PLGA-

5、BMP和BMG-BMP，以及復(fù)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的PLGA-BMP和BMG-BMP移植后均可促進(jìn)骨的形成和缺損的修復(fù)，且均為缺損區(qū)域軟骨內(nèi)成骨的表現(xiàn)，但復(fù)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的PLGA-BMP和BMG-BMP的骨修復(fù)重建速度較快。并且復(fù)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的PLGA-BMP和BMG-BMP修復(fù)骨缺損的成骨量也均優(yōu)于單純PLGA-BMP和BMG-BMP。 結(jié)論: (1)分離獲得的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)顯示，以1-5代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞作