銀杏外種皮多糖、黃芩苷抗禽白血病病毒復制作用的研究.pdf

1、研究背景
　　禽白血病病毒是禽類的致癌性逆轉錄病毒，能夠引起臨床腫瘤，目前沒有有效藥物治療和預防。國內外研發(fā)的抗病毒藥物雖然多，但是其毒副作用大，病毒易產生耐藥性，而且抗病毒的種類也有限。與西藥相比，中藥具有耐藥性低，毒副作用小等優(yōu)點，還可以抑制病毒復制和調節(jié)免疫功能等特點。根據相關文獻報道，銀杏外種皮多糖和黃芩苷具有廣譜的抗病毒作用，黃芩苷可以抑制屬于逆轉錄病毒的HIV病毒的復制?；谥暗膱蟮辣狙芯渴走x這兩種中藥作為抗禽白血病

2、毒的研究。
　　研究目的
　　本研究是在前人研究中藥抗病毒活性的基礎上，主要利用體外細胞培養(yǎng)法，研究兩種常見抗病毒中藥，銀杏外種皮多糖和黃芩苷對J亞群禽白血病病毒在DF-1細胞中復制與增殖的影響，并進一步探討中藥調節(jié)細胞抗病毒的具體機制。
　　研究方法
　　1、采用細胞毒性檢測方法對銀杏外種皮多糖和黃芩苷在DF-1細胞上的細胞毒性進行測定。利用實時熒光定量PCR方法初步鑒定這兩種藥物的抗病毒作用。
　　2、

3、體外實驗采用實時熒光定量PCR、Western blot、TCID50方法，在感染ALV-J病毒的DF-1細胞中研究銀杏外種皮多糖和黃芩苷抗病毒作用及其機制。
　　3、體內實驗采用感染ALV-J病毒130日齡家禽作為實驗動物模型，分離外周血淋巴細胞，體外進行黃芩苷藥物作用，16h后通過流式細胞儀分析不同濃度黃芩苷誘導感染ALV-J淋巴細胞的凋亡比例，初步鑒定黃芩苷促病毒感染細胞的凋亡作用。
　　研究結果
　　1、測定銀

4、杏外種皮多糖在DF-1細胞中當藥物濃度在200μg/mL時仍然沒有細胞毒性，黃芩苷無細胞毒性劑量為20μg/mL。熒光定量PCR結果初步鑒定銀杏外種皮多糖和黃芩苷可以顯著下調ALV-J病毒gp37基因在DF-1細胞中的表達。
　　2、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實驗中證明銀杏外種皮多糖可以有效抑制ALV-J的復制作用。銀杏外種皮多糖有效抑制ALV-J病毒復制作用，主要在預處理階段發(fā)揮抑制病毒的功效。同時銀杏外種皮多糖還顯著下調

5、細胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達。這種現象是否與銀杏外種皮多糖抑制病毒復制作用直接相關，還有待進一步研究。
　　3、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實驗中證明黃芩苷可以有效抑制ALV-J的復制作用，并呈現出劑量和時間依賴性。黃芩苷促使細胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達顯著下調，這種現象是否與黃芩苷抑制病毒復制作用直接相關，還有待進一步研究。初步證明黃芩苷可以誘導體外分離培養(yǎng)的ALV-J病毒感染的動物外

6、周血淋巴細胞發(fā)生凋亡，并且凋亡比例呈現藥物劑量依賴性。
　　結論
　　銀杏外種皮多糖和黃芩苷在體外DF-1細胞中均具有明顯的抗J亞群禽白血病病毒復制作用。實驗發(fā)現藥物對病毒復制影響的同時還下調病毒感染細胞中ISG12-2、IL-1β、TNF-α細胞因子表達，那么細胞因子的下調是否與抗病毒作用具有直接關聯，還有待進一步實驗證明。此外，實驗結果表明黃芩苷可以誘導ALV-J病毒感染的外周血淋巴細胞發(fā)生凋亡，其具體的促凋亡機制有待進