內毒素血癥小鼠急性肺損傷的機制及生長抑素的影響.pdf

1、目的:從炎癥和氧化應激損傷兩方面研究內毒素血癥小鼠急性肺損傷的動態(tài)改變及生長抑素(Somatostatin，SST)對其的影響和可能的干預機制。
　　 方法:
　　 1.建模
　　 取標本將96只SPF級ICR小鼠隨機分為正常對照組(n=24)，SST對照組(n=24)，內毒素血癥組(n=24)，SST干預組(n=24)。正常對照組和SST對照組腹腔注射生理鹽水，內毒素血癥組和SST干預組腹腔注射內毒素（12mg

2、/kg），SST對照組和SST干預組分別于0.5h、2h、6h、12h皮下注射思他寧（20μg/kg）。所有小鼠分別于3h、8h、16h活殺留取標本。
　　 2.大體指標觀察
　　 觀察內毒素血癥小鼠急性肺損傷的行為學改變及生長抑素對其的影響，包括皮毛、呼吸、飲食、活動及精神狀態(tài)等方面;烘干法測定肺組織濕干重比值(W/D);光鏡下觀察肺組織的病理改變。
　　 3.分子水平檢測
　　 3.1酶聯(lián)免疫吸附法(

3、ELISA)檢測小鼠血清中SST、TNF-α、IL-6、IL-10和肺組織NQO-1的含量變化;
　　 3.2化學比色法檢測小鼠肺組織MDA含量和SOD、CAT活力等氧化還原指標;
　　 3.3 RT-PCR法檢測小鼠肺組織TLR4、NF-κBp65及Nrf2 mRNA的表達;
　　 3.4 Western Blot法檢測肺組織TLR4、NF-κBp65及Nrf2蛋白的表達。
　　 結果:
　　

4、1.大體指標
　　 1.1內毒素血癥小鼠急性肺損傷行為學改變及生長抑素對其的影響
　　 正常對照組和SST對照組小鼠皮毛光滑，反應敏捷，呼吸平穩(wěn)，活動自如;內毒素血癥組小鼠皮毛粗糙無光，呼吸頻促，精神萎靡，蜷縮少動，嗜睡，進食飲水減少，口唇肢端發(fā)紺，眼周血性分泌物明顯增多，且隨著時間延長，癥狀逐漸加重;SST干預組小鼠癥狀較內毒素血癥組明顯減輕。
　　 1.2內毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織濕干重比值的改變及生長抑

5、素對其的影響
　　 與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠8h、16h肺組織濕干重比值明顯增高，且隨著時間推移逐漸加重，差異具有統(tǒng)計學意義;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠肺組織濕干重比值明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 1.3內毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織病理改變及生長抑素對其的影響
　　 正常對照組和SST對照組小鼠肺組織結構清楚，肺泡壁薄，邊緣完整，肺泡腔內無液體或炎性細胞，肺間質無炎性滲出;內毒素血癥

6、組小鼠肺組織充血，肺泡塌陷，肺泡隔增厚，部分肺泡腔內可見液體滲出以及肺間質水腫并有大量炎細胞浸潤，隨時間推移逐漸加重，16h受損最明顯;SST干預組小鼠肺組織充血較輕s，肺泡塌陷、炎性細胞浸潤的程度比內毒素血癥組有明顯減輕，肺間質水腫程度也減輕。
　　 2.分子水平檢測
　　 2.1內毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織炎癥損傷的動態(tài)改變及生長抑素對其的影響
　　 (1)內源性生長抑素水平與正常對照組比較，內毒素血癥組小

7、鼠3h、8h、16h各時間點血清SST水平明顯升高，且于8h達峰值，差異具有統(tǒng)計學意義;
　　 (2)細胞因子水平的改變及生長抑素對其的影響與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠3h、8h、16h各時間點血清TNF-α、IL-6和IL-10水平均顯著升高，并分別于8h、16h、16h達峰值;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著降低，而IL-10于3h、8h顯著升高，但16h時已明顯降低，差異有統(tǒng)計學意

8、義。
　　 (3)肺組織TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白的表達變化及生長抑素對其的影響與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠肺組織3h、8h、16h TLR4、NF-κBmRNA和蛋白表達量顯著增高，分別于16h、8h達峰值，差異有統(tǒng)計學意義;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠肺組織TLR4、NF-κB mRNA表達量于8h、16h明顯降低，而TLR4、NF-κB p65的蛋白表達量于3h、8h、16h均明顯降低，差異具有統(tǒng)計

9、學意義。
　　 2.2內毒素血癥小鼠急性肺損傷肺組織氧化應激損傷的動態(tài)改變及生長抑素對其的影響
　　 (1)肺組織MDA的含量和SOD、CAT活力的變化及生長抑素對其的影響
　　 與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠肺組織MDA含量3h、8h、16h明顯升高，SOD、CAT活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠肺組織MDA含量明顯降低，SOD活力于8h、16h明顯升高，CAT活力3h

10、、8h、16h均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 (2)肺組織NQO-1的含量變化及生長抑素對其的影響
　　 與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠3h、8h、16h各時間點肺組織NQO-1含量均顯著升高，并于8h達峰值，差異具有統(tǒng)計學意義;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠肺組織NQO-1含量于8h、16h明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義，而3h升高不明顯。
　　 (3)肺組織Nrf2 mRNA和蛋白的表達變化及

11、生長抑素對其的影響
　　 與正常對照組比較，內毒素血癥組小鼠肺組織Nrf2的mRNA和蛋白的表達量于3h、8h、16h顯著升高;與內毒素血癥組比較，SST干預組小鼠肺組織Nrf2 mRNA表達量于3h、8h、16h明顯升高，Nrf2蛋白于8h、16h表達量有明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.內毒素血癥急性肺損傷的可能機制失控性的炎癥反應和氧化應激損傷是內毒素血癥急性肺損傷的重要發(fā)病機制之一。

12、LPS激活TLR4，啟動細胞的固有免疫，釋放炎癥因子，激活NF-κB,進而啟動炎性細胞因子的基因表達，通過正反饋，造成炎癥失控。同時，炎癥會引起中性粒細胞等在肺內積聚，造成呼吸爆發(fā)，釋放出大量的活性氧，引起脂質過氧化，通過級聯(lián)放大，造成細胞毒性和臟器損傷。
　　 2.生長抑素干預的可能機制生長抑素作為一種抑制性神經(jīng)肽，可抑制P物質的作用，具有免疫調節(jié)和降低細胞因子釋放的功能。它能調節(jié)T細胞增殖分化，降低淋巴細胞的活性和中性粒細胞