KIAA1429在小鼠胚胎發(fā)育過程中的功能研究.pdf

1、隨著生命科學(xué)研究的不斷發(fā)展和最新科學(xué)研究手段的應(yīng)用，新的基因不斷被發(fā)現(xiàn)，其功能和潛在應(yīng)用也不斷被挖掘，從而不斷完善了我們對生命運行機(jī)制了解，促進(jìn)了生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展。KIAA1429廣泛存在于各種動物體內(nèi)，近年來隨著RNA甲基化的研究顯示，其參與了mRNA的6-甲基腺嘌呤的甲基化修飾，但是作用機(jī)理不明朗。在本文中我們選取小鼠作為模式動物展開對該基因的研究，使用了包括CRISPR/CAS9基因編輯技術(shù)、分子克隆、顯微操作、胚胎移植、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和

2、流式分選等多種生物實驗技術(shù)，探索基因經(jīng)過基因編輯后對于小鼠早期胚胎發(fā)育和細(xì)胞的影響。
　　具體研究分為以下兩個部分:
　　研究一:KIAA1429敲除對胚胎干細(xì)胞影響的研究。研究結(jié)果顯示:1.CRISPR載體轉(zhuǎn)染胚胎細(xì)胞，經(jīng)過流式分選轉(zhuǎn)染成功的后攜帶GFP的mES細(xì)胞。2.而后分選的細(xì)胞分為群體培養(yǎng)和單克隆細(xì)胞培養(yǎng)，而后基因組測序檢測KIAA1429突變情況，結(jié)果顯示在群體培養(yǎng)細(xì)胞的第一代可以檢測到KIAA1429突變，但是

3、傳三代之后KIAA1429突變細(xì)胞小室;而在單克隆培養(yǎng)細(xì)胞中，可以檢測到堿基缺失，但是基因序列均沒有發(fā)生移碼突變。上述結(jié)果可能顯示，KIAA1429對維持小鼠干細(xì)胞活力具有重要作用，發(fā)生攜帶移碼突變KIAA1429的細(xì)胞不能生長增殖。
　　研究二:KIAA1429的敲除對胚胎發(fā)育影響的研究。研究結(jié)果如下:1.使用生物信息學(xué)分析KIAA1429，構(gòu)建CRISPR/Cas9質(zhì)粒敲除胚胎KIAA1429基因，胚胎移植后發(fā)現(xiàn)該基因突變對胚