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文檔簡介
1、目的:本實驗主要構建pcDNA4/His/Max-YH1和mu6Pro-YH1的siRNA真核表達質粒，為后續(xù)建立高表達和無或低表達YH1的穩(wěn)定細胞株提供實驗基礎，為深入研究YH1基因在鼻咽癌發(fā)生的分子機制中的作用邁出重要的第一步。 方法:(1)pcDNA4/His/Max-YH1質粒的構建及鑒定：首先從人鼻咽組織中提取組織RNA，以RNA為模板，用所設計的帶有EcoRⅠ、XbaⅠ雙酶切位點的特異性引物進行RT-PCR擴增出目的
2、YHl基因，進行回收、純化；其次將純化的YH1基因連接到pMD18-T載體上，得到T/A克隆產(chǎn)物，用藍白篩選進行初篩，再用菌液PCR進一步篩選，篩選得到的陽性菌液測序，將測序正確的pMD18-T-YH1重組質粒與pcDNA4/His/Max質粒分別進行雙酶切、連接、陽性鑒定、測序；最后將測序的結果與GenBank中YH1的cDNA序列進行比對。 (2)SiRNA-YH1真核表達質粒的構建及鑒定：首先根據(jù)siRNA設計原則針對YH
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