GnRHa對子宮內(nèi)膜異位癥內(nèi)膜間質(zhì)細胞生長增殖及血管形成的影響.pdf

1、目的：研究亮丙瑞林(LA)對子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞生長增殖及血管形成的影響。 方法：體外原代培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞，應(yīng)用免疫細胞化學法進行細胞鑒定；用不同濃度的LA(0、0.01、0.1、1、10ug/ml)處理體外培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞0～96小時，倒置顯微鏡下觀察細胞的生長狀況及細胞的形態(tài)變化，四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測其對內(nèi)膜間質(zhì)細胞生長增殖的影響；流式細胞儀

2、(FCM)檢測不同濃度的LA對異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞凋亡及細胞周期的影響；免疫細胞化學法檢測不同濃度的LA對血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的影響。 結(jié)果：體外培養(yǎng)異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞14例，成功12例，成功率為85.7％；在位內(nèi)膜培養(yǎng)16例，均成功；異位及在位內(nèi)膜細胞傳代培養(yǎng)成功；免疫細胞化學鑒定分離培養(yǎng)的異位及在位內(nèi)膜細胞，波形蛋白染色陽性率均在95％以上。倒置顯微鏡下觀察，異位及在位內(nèi)膜細胞形態(tài)無明顯差異，24小時貼壁后，細胞

3、呈紡錘形，隨時間的推移，細胞逐漸變細長，排列呈編織狀，邊界不清，細胞間無明顯的接觸抑制，細胞培養(yǎng)10代以內(nèi)形態(tài)基本不變；不同濃度的LA作用后，異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞的生長增殖能力均降低，呈現(xiàn)濃度和時間依賴性，細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，0.01ug/ml濃度的LA作用48小時后，細胞形態(tài)變化不明顯，可見個別漂浮細胞，10ug/ml濃度的LA作用48小時后，貼壁細胞數(shù)明顯減少，細胞生長欠佳，形態(tài)變化明顯，細胞出現(xiàn)核固縮，核漿比例減小，細胞透光性

4、減低，培養(yǎng)液內(nèi)漂浮細胞明顯增多，隨處理時間的延長，上述變化更為明顯。MTT測定結(jié)果顯示LA可抑制異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞的生長增殖且呈時間劑量依賴性，0.1ug/ml的LA作用后異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞在24h、48h、72h、96h的細胞抑制率分別為33.74％、52.23％、62.04％、68.72％，在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞的細胞抑制率分別為13.13％、30.29％、44.26％、58.14％，1ug/ml的LA作用后異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞的細胞抑制率

5、分別為51.61％、60.64％、70.00％、74.31％，在位內(nèi)膜細胞的抑制率分別為24.97％、36.70％、52.68％、67.35％，LA對異位內(nèi)膜細胞的抑制作用在每一時間點均強于在位內(nèi)膜細胞，此抑制作用呈時間劑量依賴性；Annexin V-FITC和PI雙染結(jié)果顯示，LA對異位及在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞均有明顯促凋亡作用，作用48h后，兩種細胞凋亡率明顯增高，凋亡率隨濃度的增加而增高，差異有統(tǒng)計學意義，LA對異位內(nèi)膜細胞的凋亡作用強

6、于在位內(nèi)膜細胞，差異有統(tǒng)計學意義；細胞周期檢測見LA作用后，S期細胞數(shù)均減少，從G1期到S期發(fā)生抑制，此抑制作用隨濃度的增加而增強，異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞G1期細胞百分數(shù)由19.45±3.47逐漸增加到34.92±4.14(0.1ug/ml)和51.47±5.07(1ug/ml)，差異有統(tǒng)計學意義，在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞G1期細胞百分數(shù)由58.50±8.96增加到74.80±6.96(0.1ug/ml)和84.35±5.92(1ug/ml)，差異有

7、統(tǒng)計學意義。免疫細胞化學結(jié)果顯示：LA可明顯降低子宮內(nèi)膜異位癥異位及在位內(nèi)膜細胞VEGF的表達，作用48小時后，異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞VEGF表達的陽性率積分由120.80±19.46下降至70.60±5.32(0.1ug/ml)和50.80±9.09(1ug/ml)，在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞VEGF表達的陽性率積分由83.00±9.35下降至54.40±5.32(0.1ug/ml)和40.60±4.88(1ug/ml)，對異位細胞VEGF表達的影響