北柴胡不定根培養(yǎng)中生物轉(zhuǎn)化與皂苷合成研究.pdf

1、北柴胡(Bupleurum chinense DC.）是《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)規(guī)定的柴胡正品藥材的原植物，以根入藥，根中的柴胡皂苷為主要有效成分，其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d已被確認(rèn)為藥理活性化合物，具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗肝損傷、抗病毒等功效。
　　本研究以三種晉產(chǎn)北柴胡不定根為研究對(duì)象，通過(guò)向根離體培養(yǎng)體系中添加前體物質(zhì)、誘導(dǎo)子并應(yīng)用半連續(xù)培養(yǎng)方式進(jìn)行培養(yǎng)，探討了不同處理對(duì)不定根合成柴胡皂苷的影響，建立了北柴

2、胡不定根生產(chǎn)柴胡皂苷的離體培養(yǎng)體系。
　　主要研究?jī)?nèi)容有:
　　(1)建立了柴胡皂苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
　　(2)通過(guò)添加丙酮酸鈉、檸檬酸和甘氨酸等前體物質(zhì)和水楊酸、苯甲酸、硫酸鎂、硝酸鉀、氯化鈷、氯化鈣和硝酸銀等誘導(dǎo)子，研究了添加物對(duì)柴胡皂苷轉(zhuǎn)化合成的作用。
　　(3)研究了半連續(xù)培養(yǎng)法（包括補(bǔ)加培養(yǎng)基和多步控糖法）對(duì)柴胡皂苷轉(zhuǎn)化合成的影響。
　　研究結(jié)果表明:
　　(1)在附加0.37g/L硫酸鎂、3.

3、0mmol/L丙酮酸鈉、9.5g/L硝酸鉀、0.5mg/L二苯基脲雙磺酸鈣(DSC)和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，左權(quán)北柴胡不定根中的皂苷含量最高;在附加1.11g/L硫酸鎂、1.9g/L硝酸鉀、3.0mmol/L丙酮酸鈉、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，太谷北柴胡不定根中皂苷含量最高;在附加2.0mmol/L丙酮酸鈉、1.85g/L硫酸鎂、1.9g/L硝酸鉀、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/

4、2MS培養(yǎng)基中，方山北柴胡不定根中的皂苷含量最高。
　　(2)在1/2MS+0.37g/L硫酸鎂+3.0mmol/L丙酮酸鈉+9.5g/L硝酸鉀+0.5mg/LDSC+50g/L蔗糖培養(yǎng)基中繼續(xù)添加1.00mol/L甘氨酸、0.10mmol/L檸檬酸及0.01mmol/L苯甲酸，左權(quán)北柴胡不定根中柴胡皂苷的含量達(dá)到0.291％，相比提高了0.142％。
　　(3)在附加1.25mg/L氯化鈷、0.01mmol/L硝酸銀、0.

5、22g/L氯化鈣、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，左權(quán)北胡不定根中柴胡皂苷的含量達(dá)到最高;在附加12.5mg/L氯化鈷、0.22g/L氯化鈣、0.10mmol/L硝酸銀、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，太谷北柴胡不定根中柴胡皂苷的含量最高;在附加0.01mmol/L硝酸銀、12.5mg/L氯化鈷、0.44g/L氯化鈣、0.5mg/LDSC和50g/L蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中，方山北柴胡

6、不定根中的柴胡皂苷含量最高。
　　(4)左權(quán)北柴胡和太谷北柴胡不定根的生長(zhǎng)與柴胡皂苷合成對(duì)水楊酸的濃度要求相近。當(dāng)水楊酸濃度為0.001mmol/L時(shí)，無(wú)論是不定根的增殖量還是皂苷含量都達(dá)到最大值。
　　(5)在多步控糖法培養(yǎng)過(guò)程中，不定根的增殖量和皂苷含量在蔗糖總濃度為50g/L時(shí)達(dá)到最大值。
　　(6)在不定根培養(yǎng)的第30d時(shí)補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)到第60d時(shí)，太谷北柴胡和方山北柴胡不定根的長(zhǎng)勢(shì)和皂苷含量最好，左