Aβ-,25-35-誘導(dǎo)阿爾茨海默病模型大鼠海馬神經(jīng)元NT3及其受體trkC的表達(dá).pdf

1、目的： (1)：驗(yàn)證腦內(nèi)注射β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，A B)建立阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)大鼠模型的可行性和可重復(fù)性。 (2)：檢測(cè)阿爾茨海默病模型大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)元神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素3(neurotrophin-3，NT3)及其受體trkC的表達(dá)。 (3)：探討NT3及其受體在AD發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)而為AD的防治提供新思路。 方法： 30只雄

2、性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組各15只。采用立體定向下雙側(cè)海馬注射Aβ<,25-35>娟建立AD模型，麻醉成功后，固定于腦立體定向儀上，頭頂部正中切口暴露前囟。參照大鼠腦立體定位圖譜<'[1]>，雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射Aβ<,25-35>各1ul(10μg/μl)。對(duì)照組大鼠采用相同方法注射等量生理鹽水。2周后，用水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能；證明造模成功后，將大鼠麻醉，予4﹪多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注，取腦標(biāo)本，制成5 μm厚石

3、蠟切片，光鏡下觀察海馬組織結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)NT3和trkC蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．大鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果Morris 水迷宮測(cè)試：在定位航行實(shí)驗(yàn)中，AD組大鼠平均逃避潛伏期明顯高于對(duì)照組，兩組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在空間探索實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡多位于原平臺(tái)所在象限，而AD組大鼠多圍繞池壁游泳，較少游向原平臺(tái)附近，其運(yùn)動(dòng)軌跡隨機(jī)分布于各象限中。AD組大鼠2min內(nèi)跨越平臺(tái)位置次數(shù)也明顯

4、少于對(duì)照組，兩組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 2．大鼠海馬組織病理學(xué)觀察HE染色顯示，對(duì)照組大鼠海馬各區(qū)(包括CA1、CA2、CA3、CA4及hilar區(qū))神經(jīng)元呈圓形、橢圓形或錐形，核漿比值大，細(xì)胞核為圓形或橢圓形，著色均勻?yàn)闇\藍(lán)紫色，核仁明顯，CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列為3～4層，排列較整齊；而AD組大鼠海馬各區(qū)可見(jiàn)較多的神經(jīng)元胞體縮小，胞漿濃縮，核固縮，整個(gè)細(xì)胞深染成紅色，神經(jīng)元數(shù)量較對(duì)照組減少，尤以CA1區(qū)、CA3

5、區(qū)較為明顯，CA1區(qū)細(xì)胞排列為1～3層且排列較紊亂。 3．免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)大鼠海馬組織NT3及其受體trkC的表達(dá)AD組大鼠海馬CA1、CA2、CA3區(qū)NT3免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少于對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤以CA1和CA3區(qū)較為明顯(P<0.01)，而CA4區(qū)和hilar區(qū)NT3免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在兩組之間差別皆無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。AD組和對(duì)照組大鼠海馬各區(qū)trkC免疫反應(yīng)均呈弱陽(yáng)性，但AD組著色較對(duì)照組稍

6、淺。對(duì)兩組大鼠海馬相應(yīng)各區(qū)計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)發(fā)現(xiàn)，兩組trkC陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)在海馬各區(qū)皆無(wú)明顯差別(P>0.05)。 結(jié)論： (1)：A β<,25-35>誘導(dǎo)AD大鼠模型能較好的模擬AD的行為學(xué)和病理學(xué)變化，是一較為成熟的AD模型且可行性和可重復(fù)性較好。 (2)：海馬神經(jīng)元NT3的表達(dá)含量減少而非其受體trkC的下調(diào)與AD模型大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能功能損害相關(guān)，提示補(bǔ)充外源性NT3可能有助于減輕A β<,25-35>的