骨髓增生異常綜合征異常克隆在骨髓細(xì)胞中的分布及意義.pdf

1、骨髓增生異常綜合征(MDS)是一組克隆性疾病，其生物學(xué)特征是骨髓髓系細(xì)胞一系或多系發(fā)育異常(病態(tài)造血)和無效造血，外周血細(xì)胞一系或多系減少，最終出現(xiàn)骨髓衰竭或高風(fēng)險(xiǎn)轉(zhuǎn)化為急性髓性白血病(AML)。WHO分型在綜合MDS多方面的特征，尤其是形態(tài)學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)特征后，將其分類并歸入髓系腫瘤。其發(fā)病機(jī)制是累及多基因多階段的復(fù)雜病理過程，正常多克隆造血在多次基因事件后逐步被異常單克隆造血替代。目前對(duì)其具體的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。本研究主要通過細(xì)

2、胞分類聯(lián)合熒光原位雜交(FISH)技術(shù)，觀察MDS異?？寺≡诠撬韪黝惣?xì)胞中的分布和表現(xiàn)，進(jìn)一步了解MDS的病理生理過程，揭示其發(fā)病機(jī)制，分析其臨床意義，對(duì)診斷、治療和預(yù)后提供幫助。本研究分為以下三部分： 一、骨髓增生異常綜合征異?？寺≡诠撬杓?xì)胞系列中的分布 研究MDS異?？寺≡诠撬杷柘岛土馨拖档姆植迹接懏惓？寺》植寂c臨床特征的關(guān)系。大多數(shù)研究認(rèn)為MDS異?？寺±奂八柘?，是否涉及淋巴細(xì)胞則存在爭(zhēng)議。目前，國內(nèi)僅見通過免疫

3、磁珠細(xì)胞分選(MACS)聯(lián)合FISH檢測(cè)MDS異常克隆的分布，我們采用流式細(xì)胞分選(FACS)聯(lián)合FISH和細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類聯(lián)合FISH的方法檢測(cè)MDS異?？寺〉姆植肌２捎肍CM分選del(20q)的MDS患者骨髓CD15+(粒細(xì)胞)，GPA+(有核紅細(xì)胞)，CD3+CD56-CD16-(T細(xì)胞)，CD19+(B細(xì)胞)，CD3-CD56+CD16+(NK細(xì)胞)；細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類del(20q)，8號(hào)染色體三體和含有5q-復(fù)雜核型的MDS患者

4、紅系、粒系和淋巴系細(xì)胞。應(yīng)用相應(yīng)的探針，通過FISH檢測(cè)異?？寺≡诜诌x細(xì)胞中的分布，同時(shí)選取4例核型正常者作為對(duì)照組。FACS聯(lián)合FISH和形態(tài)學(xué)分類聯(lián)合FISH兩種方法檢測(cè)del(20q)患者的異常克隆在骨髓粒系(CD15+)和紅系(GPA+)中的百分率分別為70.5％/71.2％和93.3％/92.4％，檢測(cè)結(jié)果非常接近(P＞0.05)。兩種方法檢測(cè)異常克隆在淋巴細(xì)胞中的百分率均為陰性。3例三體8的患者，異?？寺≡诠撬枇Ｏ岛图t系細(xì)胞

5、中的百分率分別為68.1％、72.4％、44.4％和56.4％、57.6％和63.2％，其中1例患者異?？寺≡诹馨图?xì)胞中的百分率為10.6％，高于對(duì)照組。含有5q-復(fù)雜核型的患者，粒系和紅系中異?？寺“俜致史謩e為49.3％和60.2％，而淋巴細(xì)胞中異?？寺“俜致蕿?.85％，低于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)中觀察到漿細(xì)胞均來自正?？寺?。在此之前，國內(nèi)尚未見關(guān)于漿細(xì)胞克隆分布的報(bào)道。異常克隆分布在紅系和粒系的患者，外周血細(xì)胞水平可表現(xiàn)為正常或降低：Hb4

6、8g/L～132g/L，ANC0.38×109/L～2.6×109/L。結(jié)論：FACS聯(lián)合FISH的方法和細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合FISH的方法檢測(cè)MDS異?？寺≡诠撬韪骷?xì)胞系列中的分布，兩種方法檢測(cè)結(jié)果基本一致。MDS異?？寺≈饕植加诠撬枇Ｏ蹬c紅系細(xì)胞，個(gè)別患者分布于淋巴細(xì)胞。但是，異常克隆不表現(xiàn)在漿細(xì)胞。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MDS異常克隆在骨髓細(xì)胞系列中的分布與外周血細(xì)胞變化無明顯相關(guān)性。 二、骨髓增生異常綜合征異?？寺≡诠撬璧蛲黾?xì)胞中的

7、分布 MDS的發(fā)生發(fā)展與造血細(xì)胞凋亡失控密切相關(guān)。大部分研究表明：MDS造血細(xì)胞存在過度凋亡。有研究顯示：5q-，+8以及兩條染色體異常的MDS患者異?？寺≡诘蛲黾?xì)胞中的比例低于活細(xì)胞的比例。探討了del(20q)的MDS異?？寺≡诠撬鐰nnexinV+PI-細(xì)胞(凋亡細(xì)胞)和AnnexinV-PI-細(xì)胞(活細(xì)胞)中的分布。通過FCM分選del(20q)的MDS患者骨髓AnnexinV+PI-和AnnexinV-PI-細(xì)胞，并檢

8、測(cè)有核細(xì)胞凋亡率。然后采用LSID20S108探針和TelvysionTM20p探針對(duì)分選細(xì)胞進(jìn)行間期雙色FISH檢測(cè)；同時(shí)選取4例核型正常者作為對(duì)照組進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。本研究分析的MDSRAEB-1患者，IPSS評(píng)為INT-1，骨髓有核細(xì)胞凋亡率為16.1％。del(20q)克隆在AnnexinV+PI-細(xì)胞和AnnexinV-PI-細(xì)胞中的比例分別為32.5％和70.1％。結(jié)論：del(20q)的MDS患者骨髓細(xì)胞存在凋亡過度，del(

9、20q)的MDS凋亡細(xì)胞中大部分是正常克隆細(xì)胞，一小部分是del(20q)克隆細(xì)胞。 三、骨髓增生異常綜合征異?？寺∨c骨髓病態(tài)造血細(xì)胞的關(guān)系 病態(tài)造血是MDS造血細(xì)胞功能異常的表現(xiàn)，與細(xì)胞遺傳學(xué)異常、細(xì)胞凋亡和無效造血的關(guān)系研究不多。僅見到Bigoni和Hast等在5q-綜合征、三體8和單體7的患者進(jìn)行此方面的研究，發(fā)現(xiàn)MDS克隆在5q-綜合征的病態(tài)造血細(xì)胞中占大多數(shù)，在三體8和單體7的患者中比例較低。不僅在三體8患者，

10、而且在del(20q)和含有5q-復(fù)雜核型的MDS患者，研究MDS異?？寺≡诠撬璨B(tài)和非病態(tài)造血細(xì)胞中的分布。在Wright-Giemsa染色的骨髓細(xì)胞涂片上進(jìn)行FISH檢測(cè)，直觀統(tǒng)計(jì)病態(tài)造血細(xì)胞和非病態(tài)造血細(xì)胞的熒光標(biāo)記。結(jié)果顯示：MDS病態(tài)造血細(xì)胞中來自異?？寺〉募?xì)胞占83.3％-95.7％，異?？寺≡诜遣B(tài)造血細(xì)胞中占34.5％-91.4％。比較異?？寺≡趦深惣?xì)胞中的比例，除在del(20q)患者的紅系無顯著性差異外(P＞0.1)

11、，異常克隆在病態(tài)造血細(xì)胞中的比例均明顯高于在非病態(tài)造血細(xì)胞中的比例(P＜0.01)。在研究過程中，我們嘗試在非病態(tài)造血細(xì)胞中根據(jù)細(xì)胞分化成熟程度劃分細(xì)胞階段，觀察異?？寺〉姆植?。發(fā)現(xiàn)異?？寺》植紡脑剂＜?xì)胞中的比例(93.3％)到較成熟桿狀和分葉核粒細(xì)胞中的比例(32.5％)；從原始紅細(xì)胞中的比例(86.7％)到晚幼紅細(xì)胞中的比例(42.3％)，有明顯下降趨勢(shì)。異常克隆在復(fù)雜核型、2例三體8患者的紅系和粒系以及del(20q)患者的粒系

12、隨著分化成熟有逐漸下降趨勢(shì)(P＜0.01)；在1例三體8患者的紅系和粒系以及del(20q)患者的紅系趨勢(shì)不顯著(P＞0.1)。觀察MDS病態(tài)造血與凋亡的關(guān)系和對(duì)外周血細(xì)胞的影響。del(20q)的患者，紅系和粒系病態(tài)造血細(xì)胞大多數(shù)來自異?？寺?，結(jié)合FCM結(jié)果，凋亡細(xì)胞中一小部分為異?？寺。f明病態(tài)造血與凋亡關(guān)系不明顯。del(20q)的患者外周血Hb132g/L,ANC0.38×109/L。三體8患者中2例紅系有病態(tài)造血，1例無病態(tài)造

13、血，外周血血紅蛋白均低于正常；1例粒系無病態(tài)造血，外周血ANC2.6×109/L；2例粒系有病態(tài)造血，ANC分別為0.72×109/L和2.4x109/L。含有5q-的MDS患者，紅系和粒系都病態(tài)造血，外周血血紅蛋白和粒細(xì)胞均降低。提示MDS病態(tài)造血對(duì)外周血細(xì)胞水平影響不大。結(jié)論：MDS病態(tài)造血細(xì)胞絕大部分來自異?？寺?，是MDS異?？寺≡诩?xì)胞形態(tài)學(xué)上的反映，是MDS的特征性表現(xiàn)。MDS異常克隆可以表現(xiàn)為非病態(tài)造血細(xì)胞，而且隨著細(xì)胞分化成

14、熟，異?？寺〉谋壤饾u降低。細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)比病態(tài)造血更具有早期診斷價(jià)值，大部分MDS病態(tài)造血與無效造血關(guān)系不明顯，也不能反映凋亡狀態(tài)。 綜上所述，本研究應(yīng)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類和FACS聯(lián)合FISH技術(shù)檢測(cè)MDS異?？寺≡诠撬韪黝惣?xì)胞中的分布和表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)異?？寺≈饕植加谒柘岛筒B(tài)造血細(xì)胞，一小部分分布在凋亡細(xì)胞。進(jìn)一步結(jié)合MDS患者的臨床資料分析顯示，MDS病態(tài)造血是MDS的特征性表現(xiàn)，是MDS異?？寺≡诩?xì)胞形態(tài)學(xué)上的反映。異?？寺?/p>