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文檔簡介
1、目的:探討TLR4在血管緊張素Ⅱ所致高血壓小鼠心血管重構中的作用。
方法:將野生型的C57小鼠分為3組,空白對照組(灌注乙酸),血管緊張素Ⅱ組(1500ng/kg*min),TLR4組(灌注血管緊張素Ⅱ同時尾靜脈注射TLR4中和抗體)。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡAngⅡ)灌注7天,于灌泵前2天至灌泵后7天小鼠尾靜脈注射TLR4(Toll-likereceptor4)中和抗體,小鼠尾動脈套法測血壓,小鼠心動超聲圖
2、觀察小鼠的心臟結構和功能變化。RT-PCR檢測Collagenl,α-SMA,TGF-βmRNA的表達水平,免疫組化CollagenI,α-SMA,TGF-β染色,Masson染色檢測心臟纖維化。免疫組化檢測胸主動脈內皮素-1(ET-1)表達情況,觀察血管內皮收縮功能的變化,平滑肌α肌動蛋白(α-SMA),核增殖抗原(PCNA)免疫組化染色觀察血管平滑肌增殖和表型的轉化情況。HE染色,免疫組化mac-2染色觀察心臟組織中炎癥細胞的浸潤,
3、免疫組化和RT-PCR檢測炎性因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),單核細胞趨化蛋白-1(MonocyteChemoattractantproteinMCP-1),IL-6(interleukin-6,IL-6)的表達。用免疫組化方法檢測單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1),細胞間粘附分子(ICAM-1)在血管壁的表達。同時流式細胞學技術檢測T細胞表面早期活化分子CD69的表達。
結果:(1)血管緊張
4、素Ⅱ微量泵灌注后小鼠血壓升高,心肌細胞,血管內皮細胞TLR4的表達上調。(2)注射TLR中和抗體后,小鼠心臟超聲舒張期左室壁厚度(PWTD),收縮末期左室壁厚度(PWTD)減小,收縮末期左室容量(LVVol;S),舒張木期左室容量(LVVol;d),收縮期左室內徑(LVESD),舒張期左室內徑(LVEDD)增加(p<0.05)。注射TLR4中和抗體后,抑制了血管緊張素Ⅱ灌注后心臟代償性的收縮增強,射血分數(shù)(EF%),左室短軸縮短率(FS
5、%)降低,且接近空白對照組。心肌組織Mac-2陽性炎性細胞的浸潤減少,炎癥介質IL-1β,MCP-1,IL-6表達水平明顯降低。TGF-β表達下降,α-SMA陽性肌成纖維細胞數(shù)目減少,CollagenI表達下降,小鼠心肌間質和血管周圍纖維化減輕。(3)注射TLR4中和抗體后,小鼠血壓升高,但始終低于ANGⅡ灌注組。ET-1表達下降。血管平滑肌PCNA表達下降,α-SMA表達上升,同時發(fā)現(xiàn)血管內皮ICAM-1,血管中膜和外膜MCP-1表達
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