大黃素對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞作用的實驗研究.pdf

1、增生性瘢痕(hypertrophicscar，HS)是醫(yī)學(xué)界尚未解決的難題之一，其本質(zhì)是成纖維細(xì)胞的異常增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積，是一種常見的病理性愈合現(xiàn)象。增生性瘢痕往往破壞了組織器官的正常解剖結(jié)構(gòu)，給創(chuàng)傷后的功能恢復(fù)和重建帶來很大障礙。盡管對增生性瘢痕的發(fā)病機(jī)制和治療手段進(jìn)行了大量的研究，但目前目前仍沒有理想的結(jié)果。增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(hpertrophicscarfibroblasts，HSFb)是產(chǎn)生瘢痕的主要細(xì)胞。大黃素(

2、Emodin)具有廣泛的藥理作用，包括抑制器官纖維化、抗腫瘤、抗炎等。本實驗對體外培養(yǎng)的HSFb進(jìn)行了以下實驗內(nèi)容，深入研究Emodin對HSFb的抑制作用，以探討Emodin對HS的作用方式和機(jī)制，為臨床治療HS提供理論依據(jù)。 方法： 分離培養(yǎng)HSFb，取4～6代細(xì)胞，實驗組Emodin終濃度為20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml，對照組選擇完全培養(yǎng)基處理，觀察藥物對細(xì)胞的影響。 檢測指標(biāo)：

3、1.MTT法檢測細(xì)胞增殖活力的變化； 2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化及各時相所占的比例； 3.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況； 4.激光共聚焦法檢測細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]濃度的變化及釋放情況； 5.3H-脯氨酸摻入法檢測細(xì)胞膠原蛋白的合成； 6.RT-PCR方法檢測I型膠原mRNA的表達(dá)水平； 7.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactor-β1，T

4、GF-β1)的表達(dá)； 8.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)的表達(dá)。 結(jié)果： 1.MTT比色結(jié)果顯示Emodin作用后HSFb的增殖呈現(xiàn)出明顯的抑制趨勢，且和藥物濃度呈相關(guān)性。 2.Emodin作用后，HSFb細(xì)胞G0/G1期百分比增加，而S期和G2/M期百分比則減少，從而阻滯細(xì)胞進(jìn)入S期，使DNA合成受阻。 3.Emodin處理后細(xì)胞凋亡

5、率增加，和對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。 4.Emodin作用后，HSFb胞內(nèi)鈣庫大量釋放[Ca2+]，形成胞漿鈣超載現(xiàn)象，從而抑制HSFb的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 5.Emodin作用后HSFb的膠原合成率減少，并且呈現(xiàn)出明顯的時間-效應(yīng)依賴性。 6.Emodin降低HSFb中的I型膠原mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。 7.Emodin抑制HSFb中TGF-β1的表達(dá)：圖形分析軟件分析結(jié)果表明，和對照組相比，干預(yù)組TGF-

6、β1表達(dá)下降。 8.Emodin抑制HSFb中α-SMA的表達(dá)：圖形分析軟件分析結(jié)果表明，和對照組相比，干預(yù)組α-SMA表達(dá)下降。 結(jié)論： 1.Emodin阻滯細(xì)胞周期與G0/G1期，抑制細(xì)胞增殖，并且促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這種改變細(xì)胞增殖/凋亡的機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)[ca2+]超載有關(guān)； 2.Emodin可以改變細(xì)胞外膠原合成/降解功能的比例，減少細(xì)胞外膠原的堆積，并可以在mRNA轉(zhuǎn)錄水平抑制I型膠原的表達(dá)；