絲素蛋白-納米羥基磷灰石與兔BMSC體外構(gòu)建組織工程骨的初步研究.pdf

1、目的:
　　 研究絲素蛋白/納米羥基磷灰石復(fù)合材料與兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)的結(jié)和程度及構(gòu)建組織工程骨的可行性
　　 方法:
　　 第一步:使用全骨髓法體外分離純化得到兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)，以細(xì)胞數(shù)為縱軸，時間為橫軸，繪制生長曲線。
　　 第二步:判斷所培養(yǎng)細(xì)胞是否為兔BMSC。方法是依據(jù)生長曲線取增值能力最強(qiáng)的一代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，然后堿性磷酸酶

2、染色檢驗(yàn)。結(jié)合兩者判斷是否為兔BMSC。
　　 第三步:將兔BMSC與SF/nHA在體外共同培養(yǎng)，構(gòu)建組織工程骨模型，通過顯微鏡及掃描電鏡觀察細(xì)胞與復(fù)合材料體外結(jié)合程度，并建立對比組（兔BMSC與骨誘導(dǎo)人工骨），選幾個不同(2d，5d，2w)時間點(diǎn)，觀察結(jié)合程度有何差異。
　　 第四步:再將從兩種材料洗脫下來的細(xì)胞接種培養(yǎng)，與同條件下培養(yǎng)的正常的細(xì)胞作為對照，進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)和生長觀察，評價復(fù)合材料的生物相容性。
　　

3、 結(jié)果:
　　 1、使用全骨髓法體外分離純化得到兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)，進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)呈多角形及圓錐形，然后堿性磷酸酶染色陽性。通過細(xì)胞形態(tài)、成骨誘導(dǎo)以及堿性磷酸酶染色可以證明本實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng)的細(xì)胞是兔BMSC。
　　 2、絲素蛋白/納米羥基磷灰石復(fù)合材料組細(xì)胞粘附率和骨誘導(dǎo)人工骨的細(xì)胞粘附率分別為31.8％和17.6％。兩者比較有顯著性差異(p＜0.05)
　　 3、從兩種材料洗脫

4、下來的細(xì)胞接種培養(yǎng)，與正常的細(xì)胞（以同樣的細(xì)胞濃度接種，常規(guī)培養(yǎng)）作為對照，細(xì)胞形態(tài)無明顯差異。
　　 4、掃描電鏡下觀察兩種材料上BMSC細(xì)胞的粘附情況、數(shù)量及所分布表面，絲素蛋白/納米羥基磷灰石復(fù)合材料均優(yōu)于骨誘導(dǎo)人工骨。
　　 結(jié)論:
　　 1、絲素蛋白/納米羥基磷灰石復(fù)合材料與兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)體外構(gòu)建的是一種理想的組織工程骨。
　　 2、絲素蛋白/納米羥基磷灰石復(fù)合材料比誘導(dǎo)人工骨能