喉鱗癌microRNA表達(dá)譜變化及miR-125b對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖影響的研究.pdf

1、第一部分喉鱗癌microRNA表達(dá)譜變化及候選靶基因分析
　　 背景：microRNA(微小RNA，簡(jiǎn)稱miRNA)是一種非編碼RNA，在惡性腫瘤的基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。本部分研究miRNA在喉鱗癌組織中表達(dá)譜變化，為L(zhǎng)SCC研究提供了新的方向。
　　 方法：通過(guò)激光顯微切割技術(shù)(LCM)分離6例喉癌組織腫瘤細(xì)胞，采用miRNA芯片篩查喉癌組織與癌旁正常組織中miRNA表達(dá)譜變化，在48對(duì)喉癌組織及癌旁正常組織中

2、，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)驗(yàn)證miRNA芯片結(jié)果，通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)這些差異表達(dá)miRNAs的靶基因，在24對(duì)喉癌組織中檢測(cè)候選基因的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：通過(guò)miRNA芯片檢測(cè)，篩查得到29個(gè)差異表達(dá)的miRNAs，經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證后，有6個(gè)被證實(shí)包括表達(dá)上調(diào)的miR-21、miR-93、miR-205和miR-708，表達(dá)下調(diào)的miR-125b和miR-145。使用軟件預(yù)測(cè)共有25個(gè)候選靶基因，經(jīng)檢測(cè)后有10個(gè)候選

3、基因在LSCC中表達(dá)水平有差異。
　　 結(jié)論：這些差異表達(dá)的miRNA在喉癌的發(fā)生和演進(jìn)過(guò)程中可能發(fā)揮了重要作用，并且為miRNA的功能研究提供了方向。
　　 第二部分 miR-125b通過(guò)EIF2C2抑制喉癌Hep-2細(xì)胞增殖
　　 失控的自主性增殖是惡性腫瘤細(xì)胞具有的主要特征之一，細(xì)胞周期控制紊亂導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控異常。本部分在體外和體內(nèi)水平研究上調(diào)miR-125b對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制。

4、r>　　 方法：采用慢病毒載體構(gòu)建miR-125b表達(dá)載體，感染Hep-2細(xì)胞后建立能夠穩(wěn)定高表達(dá)miR-125b的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株Hep-2-miR-125b和對(duì)照細(xì)胞株Hep-2-vector，WST-1實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化。并將Hep-2-miR-125b和Hep-2-vector細(xì)胞接種NOD/SCID小鼠，觀察小鼠移植瘤生長(zhǎng)情況。采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)初步驗(yàn)證EIF2C2(eukaryot

5、ic translation initiation factor2C-2，真核轉(zhuǎn)錄起始因子2C-2)是miR-125b的靶基因，在兩株細(xì)胞中檢測(cè)候選基因EIF2C2 mRNA表達(dá)和蛋白水平變化。
　　 結(jié)果：Hep-2-miR-125b能夠穩(wěn)定、高水平表達(dá)miR-125b，miR-125b過(guò)表達(dá)后能夠抑制Hep-2細(xì)胞的增殖能力，抑制NOD/SCID小鼠體內(nèi)成瘤能力，使Hep-2細(xì)胞停滯于G0-G1期，凋亡沒有變化。雙熒光素酶報(bào)