探討HBX激活PI3K-Akt信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和遷移的作用.pdf

1、目的：探討HBX激活PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和遷移的作用。
　　方法：(1)應(yīng)用脂質(zhì)體法將pcDNA3.1、pcDNA3.1-X分別轉(zhuǎn)染Huh-7細(xì)胞，經(jīng)G418篩選，克隆，建立陰性對(duì)照的細(xì)胞模型Huh-7-Mock和穩(wěn)定表達(dá)HBX的細(xì)胞模型Huh-7-HBX。運(yùn)用RT-PCR、Western blot和免疫熒光方法檢測(cè)細(xì)胞模型中HBX mRNA及蛋白表達(dá)。(2)運(yùn)用阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路

2、后，用Western blot方法分析Huh-7-HBX細(xì)胞中p-Akt蛋白的表達(dá)水平，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Huh-7-HBX細(xì)胞的增殖情況，采用Transwell和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)方法觀察Huh-7-HBX細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)果：(1)經(jīng)RT-PCR、Western blot和免疫熒光檢測(cè)結(jié)果均顯示Huh-7-HBX細(xì)胞中HBX基因的表達(dá)，而Huh-7-Mock細(xì)胞中未見HBX基因的表達(dá)。(2)Western

3、blot結(jié)果顯示，與Huh-7-Mock細(xì)胞相比，Huh-7-HBX細(xì)胞中p-Akt蛋白表達(dá)增多(P<0.05)，經(jīng)阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后，其p-Akt蛋白表達(dá)降低(P<0.05)。(3)CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Huh-7-Mock細(xì)胞相比，Huh-7-HBX細(xì)胞的增殖能力增加(P<0.05)，經(jīng)阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后，Huh-7-HBX細(xì)胞增殖能力減弱