一例家族性高膽固醇血癥患者LDL受體基因新突變位點(diǎn)的臨床意義.pdf

1、目的: 家族性高膽固醇血癥（FH，MIM 143890）是一種常見的常染色體單基因顯性遺傳性疾病，是研究膽固醇升高導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化（As）作用機(jī)制的極好范例，對(duì)冠心病的防治具有重要意義。為進(jìn)一步明確我國FH的發(fā)病機(jī)制，本文通過研究一例FH患者低密度脂蛋白受體（LDL-R）基因突變類型，及細(xì)胞LDL-R功能的改變，分析FH患者LDL-R突變基因與臨床表型的關(guān)系，探討突變位點(diǎn)對(duì)FH的影響。 方法： 以一例經(jīng)臨床確診的

2、FH患者及其家系為研究對(duì)象，進(jìn)行常規(guī)體格檢查，心電圖及心血管超聲等檢查；常規(guī)生化檢測(cè)FH家系成員血脂等；流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)淋巴細(xì)胞4℃、37℃孵育時(shí)結(jié)合及內(nèi)化LDL的功能；提取外周血基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增患者載脂蛋白B100(Apo B100) 包括Q3500R、R3531C和 R3501W位點(diǎn)在內(nèi)的片段，以排除Apo B100缺陷癥；擴(kuò)增患者LDL-R基因全部18個(gè)外顯子和啟動(dòng)子，進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（SSC

3、P）；對(duì)有異常單鏈的片段進(jìn)行核苷酸序列分析，與Genebank進(jìn)行同源性比較，以發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)，分析突變性質(zhì)，并在家系分析中驗(yàn)證該突變；檢索英國FH突變數(shù)據(jù)庫，如果在已經(jīng)公布的771種突變中未見報(bào)道，則認(rèn)為是新的突變位點(diǎn)；進(jìn)而采用SSCP測(cè)定該突變?cè)?00個(gè)正常人中的發(fā)病率，如小于1％則認(rèn)為是致病性突變。 結(jié)果： 該FH患者心電圖顯示Ⅰ、avL、Ⅴ5和Ⅴ6導(dǎo)聯(lián)ST段斜下型下移≥0.05mV，T波倒置，血管超聲檢查左頸總動(dòng)脈

4、管腔內(nèi)膜增厚約0.12mm，右側(cè)股動(dòng)脈內(nèi)膜有強(qiáng)回聲斑塊2×3 mm；超聲心動(dòng)圖示三尖瓣返流，流速273cm/s,壓差為29.8；淋巴細(xì)胞LDL-R結(jié)合和內(nèi)化的活性均明顯下降；核苷酸序列分析未見ApoB100基因Q3500R、R3531C和 R3501W位點(diǎn)突變；SSCP電泳發(fā)現(xiàn)LDL-R基因第4外顯子異常單鏈，核苷酸序列分析證實(shí)該基因第691位點(diǎn)T＞C改變，氨基酸密碼子由TGC轉(zhuǎn)變?yōu)镃GC，編碼的半胱氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫彼幔–210R），為純

5、合錯(cuò)義突變，父親及母親該基因均發(fā)現(xiàn)上述突變；經(jīng)檢索英國FH突變數(shù)據(jù)庫，在已經(jīng)公布的771種突變中未見報(bào)道，由此認(rèn)為該患者的LDL-R突變?yōu)橐恍碌奈稽c(diǎn)；該突變?cè)?00例正常人中的發(fā)病率為0％（＜1％），故認(rèn)為是致病性突變。 結(jié)論： 1.該患者符合FH和冠心病臨床診斷，動(dòng)脈硬化程度嚴(yán)重。 2.該患者Apo B100 基因包括Q3500R、R3531C和 R3501W位點(diǎn)在內(nèi)的片段未見突變，可排除患家族性Apo B10