淫羊藿對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：本文以Wistar大鼠為研究對(duì)象，自備淫羊藿含藥血清。觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在淫羊藿的干預(yù)下，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD44、FN、PCNA和細(xì)胞增殖的情況。進(jìn)而說(shuō)明淫羊藿壯骨強(qiáng)筋的功效，為防止骨質(zhì)疏松中藥藥物篩選提供參考。 實(shí)驗(yàn)方法： (1)利用貼壁法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。細(xì)胞以1x10<'5>/ml接種于25cm<'2>培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)至瓶底長(zhǎng)滿細(xì)胞，即可傳代。 (2)自備含藥血清：每只按4.4g/KG灌服(相

2、當(dāng)于成人用量的20倍，約0.7克)，連續(xù)給藥一周，每日3次，末次給藥一小時(shí)后，無(wú)菌條件下，心臟取血6ml/只。離心15分鐘(2000r/min)，收集血清(10ml)，56℃補(bǔ)體滅活(嚴(yán)密觀察溫度波動(dòng))。 (3)將培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分為三組：含藥血清組、地塞米松組、普通組。用含藥血清、地塞米松、普通血清對(duì)三組細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)。含藥血清組與地塞米松組的各組培養(yǎng)基中，加入10ml干預(yù)物；普通組加10ml牛血清。 (4)利用細(xì)

3、胞免疫組化法觀察細(xì)胞表達(dá)CD44、FN和PCNA的情況。 結(jié)果： (1)第2-5天的細(xì)胞計(jì)數(shù)表明了，含藥血清組和地塞米松的細(xì)胞增殖明顯。同時(shí)，第3天的細(xì)胞免疫組化看來(lái)，含藥血清組、地塞米松組和普通血清組的細(xì)胞均能表達(dá)PCNA。 (2)在第5、10、15、21天時(shí)，從鏡下觀察細(xì)胞免疫組化圖片來(lái)看，含藥血清組和地塞米松組都能表達(dá)PCNA、CD44及FN，說(shuō)明含藥血清的誘導(dǎo)能力與地塞米松相同。 (3)淫羊藿有使