歐洲葡萄‘無(wú)核白’VDAC基因功能分析.pdf

1、葡萄作為全球范圍內(nèi)重要的經(jīng)濟(jì)類(lèi)果樹(shù)，被廣泛應(yīng)用于鮮食、制汁和釀酒。歐洲葡萄無(wú)核白（Vitis vinifera cv.‘Thompson Seedless’）是栽培最廣泛的制干與鮮食品種，在生產(chǎn)中具有重要地位。電壓依賴(lài)性陰離子通道蛋白(voltage-dependent anion channels，VDAC)是線粒體外膜上含量最高的蛋白，在線粒體外膜與細(xì)胞質(zhì)之間具有調(diào)控代謝物質(zhì)進(jìn)出的功能，并且參與線粒體能量代謝、線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、

2、生長(zhǎng)發(fā)育與生殖等生命活動(dòng)，具有重要的生理功能。然而有關(guān)葡萄中VDAC蛋白功能的研究鮮見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。為了進(jìn)一步研究無(wú)核白葡萄中VDAC蛋白質(zhì)的功能，本研究對(duì)VvVDAC基因家族6個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平，VvVDAC基因家族蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，亞細(xì)胞定位特性，水楊酸(SA)處理下各VvVDAC基因家族蛋白瞬時(shí)表達(dá)的生物學(xué)功能進(jìn)行了研究，取得的主要結(jié)果如下:
　　1.預(yù)測(cè)的VvVDAC基因家族蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)表明:除VvVDAC6.1與VvVDAC6

3、.2不含α-螺旋結(jié)構(gòu)的N端外，其余成員均由β-折疊桶與α-螺旋結(jié)構(gòu)的N端構(gòu)成保守的通道蛋白結(jié)構(gòu)，家族成員中的β-折疊片數(shù)量在9-19個(gè)之間。VvVDAC3、VvVDAC5氨基酸序列包含典型真核生物線粒體通道蛋白標(biāo)志性結(jié)構(gòu)域(MPS)。原生質(zhì)體亞細(xì)胞定位結(jié)果表明:VvVDAC3與VvVDAC4定位于線粒體上，VvVDAC1.1與VvVDAC5定位于線粒體及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)其他部位，表明無(wú)核白葡萄VvVDAC蛋白質(zhì)線粒體定位特性并不完全取決于MPS

4、結(jié)構(gòu)域，或同時(shí)受其他結(jié)構(gòu)域影響。
　　2.VvVDAC基因家族瞬時(shí)轉(zhuǎn)化模式植物煙草（Nicotiana benthamiana）葉片，并且對(duì)葉片進(jìn)行了SA處理，結(jié)果表明:VvVDAC1.1是主要的響應(yīng)SA引起的過(guò)氧化氫積累的線粒體通道蛋白;過(guò)氧化氫積累不能引起VvVDAC介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　3.提取無(wú)核白葡萄根、莖、葉、卷須及花組織中的總RNA，采用RT-PCR分別檢測(cè)了VvVDC基因家族6個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果表明:Vv