重組蝙蝠流感病毒的生物學(xué)特性的研究.pdf

1、蝙蝠是世界上種類極為豐富的哺乳動(dòng)物，將近有1200多個(gè)不同的種類，分布在除了兩極外世界的各個(gè)地區(qū)。蝙蝠也是重要的病毒攜帶者，能夠攜帶至少170種病毒。2012年研究人員在蝙蝠身上發(fā)現(xiàn)了H17N10亞型蝙蝠流感病毒。蝙蝠是否是流感病毒的宿主之一，尚不清楚。在基因組結(jié)構(gòu)方面，蝙蝠流感病毒與其它甲型流感病毒有許多相同的地方，也有許多不同的地方。人們掌握了H17N10亞型流感病毒的序列結(jié)果，但H17N10亞型流感病毒還不能利用實(shí)驗(yàn)室的方法重組得

2、到。
　　本研究利用反向遺傳操作技術(shù)將H17N10亞型流感病毒內(nèi)部基因分別與H9N2亞型、H1N1亞型流感病毒攜帶蝙蝠流感病毒包裝信號(hào)的表面基因進(jìn)行重組，拯救出重組蝙蝠流感病毒，分別命名為cH9cN2/H17、cH1cN1/H17。
　　為了研究拯救病毒在MDCK細(xì)胞和DF1細(xì)胞中的生長(zhǎng)規(guī)律，將cH9cN2/H17、cH1cN1/H17以MOI（感染復(fù)數(shù)）為0.001病毒量分別在MDCK，DF1細(xì)胞上進(jìn)行接種病毒。分別在接種

3、病毒后12h、24h、36h、48h收取病毒液，之后進(jìn)行病毒滴度(TCID50)測(cè)定。表明，重組蝙蝠流感病毒cH9cN2/H17、cH1cN1/H17在MDCK細(xì)胞、DF1細(xì)胞中生長(zhǎng)36h時(shí)，病毒滴度達(dá)到最高。
　　為了研究這兩株病毒在小鼠體內(nèi)的生物學(xué)特性，106TCID50的病毒量滴鼻感染小鼠，結(jié)果表明，將重組蝙蝠流感病毒cH9cN2/H17、cH1cN1/H17鼻腔接種五周齡小鼠，不會(huì)引起小鼠體重下降等異常，也不導(dǎo)致小鼠死亡。

4、但在接種病毒后3天、5天剖殺的小鼠肺臟中檢測(cè)到較高的病毒滴度。在小鼠體內(nèi)接種重組蝙蝠流感病毒cH9cN2/H17、cH1cN1/H1715天后分離小鼠血清，可以檢測(cè)到小鼠血清轉(zhuǎn)陽。
　　本研究成功利用反向遺傳操作系統(tǒng)重組了蝙蝠流感病毒，對(duì)重組蝙蝠流感病毒在MDCK細(xì)胞、DF1細(xì)胞的相互適應(yīng)提供一定的參考依據(jù)，為進(jìn)一步研究蝙蝠重組流感病毒的致病性等奠定了基礎(chǔ)。并對(duì)cH9cN2/H17、cH1cN1/H17在小鼠體內(nèi)的生物學(xué)特性進(jìn)行探