棉酚體內(nèi)外代謝及排泄途徑的研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　棉酚作為天然多酚化合物，具有多種療效。近年來，棉酚的抗腫瘤活性被廣泛研究。隨著對棉酚抗腫瘤機制進一步全面的認識，棉酚極有可能成為一種頗有前景的抗腫瘤藥物。本研究的目的為探究棉酚在體內(nèi)外的消除路徑（包括代謝和排泄），對棉酚作為抗腫瘤藥物的開發(fā)有著重大的意義。
　　實驗方法與結(jié)果：
　　1.棉酚在大鼠血漿、尿液、糞便中代謝產(chǎn)物的鑒定。
　　采用UPLC-QTOF/MS聯(lián)合Metabolynx分析

2、對棉酚在大鼠體內(nèi)靜注給藥后血漿、尿液、糞便中的代謝產(chǎn)物進行了分析鑒定。結(jié)果顯示在大鼠糞便樣品中發(fā)現(xiàn)1個葡萄糖醛酸結(jié)合代謝產(chǎn)物（G3），而在血漿和尿液中，沒有發(fā)現(xiàn)任何代謝產(chǎn)物。對大鼠血漿，尿液和糞便樣品的分析表明：葡萄糖醛酸化代謝為棉酚在大鼠體內(nèi)的唯一代謝途徑。
　　2.棉酚在大鼠體內(nèi)藥物動力學與膽汁排泄研究。
　　在大鼠膽管插管實驗中，我們通過對高、低劑量組（靜注：5 mg/kg、2 mg/kg）膽管插管大鼠的膽汁進行收集和

3、分析，均發(fā)現(xiàn)大量棉酚和棉酚的3個葡萄糖醛酸代謝物。低劑量組8 h內(nèi)棉酚和3個葡萄糖醛酸代謝物（G1、G2、G3）在膽汁中的排泄量分別為0.18μmol/kg、0.05μmol/kg、0.03μmol/kg、2.92μmol/kg。經(jīng)膽汁排泄的棉酚及其葡萄糖醛酸代謝物分別占總劑量的5.0±1.1％和83.2±29.1%。高劑量組8 h內(nèi)棉酚和G1，G2，G3在膽汁中的排泄量分別為0.27μmol/kg、0.29μmol/kg、3.32μm

4、ol/kg、1.30μmol/kg；經(jīng)膽汁排泄的棉酚及其葡萄糖醛酸代謝物分別占總劑量的20.0±13.0%和58.8±17.4%。該結(jié)果表明棉酚在大鼠肝臟內(nèi)主要發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝，代謝產(chǎn)物經(jīng)膽汁排泄為大鼠體內(nèi)清除棉酚的主要機制。
　　3.棉酚在大鼠在體單向腸灌流模型中的腸吸收。
　　在大鼠在體單向腸灌流模型中，實驗計算得到的有效吸收系數(shù)P*eff值為4.4，表明棉酚的腸吸收良好。G1，G2，G3排入到腸腔和膽汁中的比例分別

5、為總量的2.5%和4.8%。以原型化合物棉酚排入膽汁的比例為6%，與代謝物G1、G2、G3經(jīng)膽汁排泄的比例相當，表明以原型化合物棉酚和代謝物經(jīng)膽汁排泄是大鼠體內(nèi)清除棉酚的重要途徑。
　　4.棉酚在大鼠和人肝、腸微粒體中的酶動力學研究。
　　棉酚體外酶動力學研究主要通過大鼠和人肝、腸微粒體進行。棉酚在大鼠和人的肝、腸微粒體中都產(chǎn)生了3種葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物，即G1，G2和G3，葡萄糖醛酸化生成的速率隨著不同的酶而不同。對于大鼠

6、肝微粒體，G1，G2，G3相對生成速率為1：15：14；對于大鼠腸微粒體，G1，G2，G3相對生成速率為1：11：7；對于人肝微粒體，G1，G2，G3相對生成速率為1：1.1：1；對于人腸微粒體，G1，G2，G3相對生成速率為1：2.9：1.5。大鼠微粒體中G2或G3的生成速率比G1更快（大于7倍），而在人微粒體中并未檢測到如此巨大差異。棉酚在大鼠的肝、腸微粒體的酶動力學曲線進行米氏方程擬合，在人的肝、腸微粒體的酶動力學曲線則進行底物抑

7、制方程擬合。棉酚微粒體葡萄糖醛酸化的Km值范圍為0.64-5.6μM，表明棉酚是具有高度親和力的葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT酶）的底物。
　　5.篩選參與棉酚葡萄糖醛酸化代謝的UGT亞型。
　　通過棉酚與具有商業(yè)來源的12種UGT亞型（UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15、UGT2B17）共同孵育，鑒定主要參與