高尿酸直接抑制胰島素信號誘導胰島素抵抗產(chǎn)生.pdf

1、背景:
　　高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂引起的一種代謝性疾病。隨著近年我國人民生活水平的提高，高尿酸血癥的患病率也顯著升高。研究表明，高尿酸水平不僅和痛風的發(fā)病密切相關，也和體內多種代謝紊亂疾病如代謝綜合癥、高血壓、高脂血癥、肥胖等存在關聯(lián)。此外，高尿酸血癥常與糖代謝異常尤其是胰島素抵抗并發(fā)，但其相互關系及內在機制不甚明了。已有研究表明，高尿酸血癥可以直接參與糖脂代謝紊亂、內皮細胞損傷、腎損傷、炎癥等重要病理生理過程。有研究指出氧化壓

2、力的增加導致對胰島素抵的敏感性下降，是胰島素抵抗的危險因素。高的尿酸水平可增加脂肪細胞、血管平滑肌細胞、血管內皮細胞及腎小球系膜細胞的氧化壓力。而高尿酸對胰島素抵抗產(chǎn)生中起的作用及其內在機制很少被報道。
　　目的:
　　體內研究急性小鼠高尿酸血癥模型中高尿酸對糖耐量、胰島素耐量以及周圍組織的胰島素信號的影響；體外研究高尿酸對人HepG2細胞氧化壓力和胰島素信號的影響以明確其中可能的分子機制；明確高尿酸在胰島素抵抗產(chǎn)生中的作用

3、及分子機制。
　　方法:
　　1.建立急性小鼠高尿酸血癥模型，比較正常小鼠和模型鼠的糖耐量和胰島素耐量。
　　2.用胰島素刺激10min后取對照組和模型小鼠的肝臟、脂肪和肌肉組織，檢測對胰島素信號分子IRS1和Akt磷酸化的影響。
　　3.用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝細胞株HepG2細胞。為檢測高尿酸對HepG2細胞活性氧的影響，細胞分成六組：空白組、溶劑組（0.5M NaOH×30min）、高尿酸

4、組（15mg/dl×30min）、高尿酸+10NAC組、高尿酸+20NAC組、NAC組。再用DCFH-DA探針37℃下作用細胞30min，倒置熒光顯微鏡以及流式細胞儀檢測活性氧水平變化。
　　4.用不同濃度（0、5、15mg/dl）尿酸作用HepG2細胞30min，100nmol/l胰島素作用10min，蛋白免疫印跡（Western Blot）方法檢測尿酸刺激后胰島素信號分子IRS1和Akt磷酸化水平的影響。HepG2細胞用抗氧化

5、劑NAC（10mM、20mM）預處理24h后，蛋白免疫印跡（Western Blot）方法檢測高尿酸組和對照組胰島素信號分子IRS1和Akt磷酸化水平。
　　結果:
　　1.高尿酸血癥模型小鼠糖耐量受損、對胰島素的敏感性下降。
　　2.高尿酸血癥模型小鼠肝臟、肌肉和脂肪組織的胰島素信號通路IRS1(ser307/312)磷酸化增加、Akt（S473）磷酸化抑制。
　　3.高尿酸（15mg/dl）顯著增加HepG2

6、細胞內活性氧的產(chǎn)生，抗氧化劑NAC（10mM、20mM）阻滯由高尿酸引起的活性氧水平增加。
　　4.高尿酸（15mg/dl）作用 HepG2細胞株30min，誘導胰島素信號通路IRS1(ser307/312)磷酸化增加、Akt（S473）磷酸化抑制，而抗氧化劑 NAC能阻滯高尿酸誘導的胰島素信號通路IRS1(ser307/312)磷酸化增加、Akt（S473）磷酸化抑制作用。
　　結論:
　　本研究首次提供了高尿酸誘導