馬哈利櫻桃矮化砧的DNA甲基化水平及模式初步分析.pdf

1、馬哈利‘CDR-1’砧木由于抗根癌病強又抗寒、耐鹽堿，適宜在中國北方地區(qū)種植推廣。矮化砧木有利于密植栽培，并能促進早果，但馬哈利植株的矮化問題一直沒有解決。
　　生物體可借助基因的甲基化參與基因的表達調控，尤其是啟動子和編碼區(qū)的甲基化狀態(tài)，若其發(fā)生去甲基化，則可激活基因表達，反之，若其發(fā)生甲基化，則能抑制基因表達。已有實驗證明，矮生型植株和正常植株的甲基化修飾狀態(tài)不同。MSAP是一種用途最廣泛的全基因組甲基化檢測工具，且MSAP技

2、術可以檢測不同品系植株的DNA甲基化差異。
　　本研究，從馬哈利‘CDR-1’自然狀態(tài)下自交后代中選擇較矮化的25棵植株（記為矮化組），并與普通高度馬哈利‘CDR-1’的25棵植株（記為半矮化組）作對比，借助MSAP技術得到它們的甲基化圖譜，進而分析它們的甲基化水平及模式，以探討其矮化的表觀性狀與其基因組甲基化修飾的關系。實驗結果如下:
　　1.優(yōu)化了酶切、預擴增、選擇性擴增體系，獲得了適宜于馬哈利砧木進行MSAP分析的體系

3、。從64對選擇性引物組合中篩選出15對，獲得了馬哈利矮化組25株個體和半矮化組25株個體的MSAP擴增圖譜。
　　2.15對引物在矮化組和半矮化組中共檢測到9021個條帶，平均每株個體檢測到180個;半甲基化685個，平均每株個體檢測到14個，半甲基化率7.59％;全甲基化2657個，平均每株個體檢測到53個，全甲基化率29.45％。由此說明馬哈利砧木基因組“CCGG”位點甲基化的主要方式為雙鏈內側的全甲基化。半矮化組中共擴增45

4、77個條帶，其中半甲基化336個，全甲基化1274個;矮化組中共擴增4444個條帶，其中半甲基化349個，全甲基化1383個。方差分析結果表明，矮化組與半矮化組在全甲基化水平和總甲基化水平上差異極顯著，在半甲基化水平上差異顯著，說明矮化組的甲基化水平高于半矮化組。
　　3.對擴增位點的甲基化模式分析結果表明，半矮化組總擴增位點的85.53％是甲基化多態(tài)性位點，矮化組總擴增位點的89.31％是甲基化多態(tài)性位點，表明矮化組多態(tài)性高于半