神經(jīng)干細(xì)胞與腦腫瘤干細(xì)胞體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)特性比較.pdf

1、【目的】探索人胚神經(jīng)干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)的條件，并觀察比較其在體外分離培養(yǎng)的生長(zhǎng)特性。用CDl33免疫磁珠分選陽(yáng)性細(xì)胞后為進(jìn)一步研究提供材料。 【方法】神經(jīng)干細(xì)胞：取米非司酮流產(chǎn)8．12周胎齡的人胚胎，從胎腦皮層分離組織，采用胰蛋白酶消化和機(jī)械吹打的方法獲得單細(xì)胞懸液。采用無(wú)血清培養(yǎng)基(DMEM／F12)，加入EGF和bFGF(20ng／m1)細(xì)胞因子和N2添加劑刺激細(xì)胞增殖，從而進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)、連續(xù)傳代。添加

2、10％胎牛血清誘導(dǎo)分化，免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定神經(jīng)干細(xì)胞(Nestin)和分化成熟的神經(jīng)元(NSE)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP)及少突膠質(zhì)細(xì)胞(CNP)。膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞：將SHG44細(xì)胞系和人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本采用胰蛋白酶消化獲得單細(xì)胞，用CDl33免疫磁珠分離陽(yáng)性細(xì)胞、之后分別應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基(DMEM／F12，添加bFGF、EGF)培養(yǎng)。形成腫瘤球后用添加10％胎牛血清誘導(dǎo)分化，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)腫瘤球細(xì)胞及其分化細(xì)胞中的Nestin、N

3、SE、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞在下一步應(yīng)用之前均行CDl33免疫磁珠復(fù)選。同一時(shí)間點(diǎn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，比較增殖活力。 【結(jié)果】從人胎腦分離的細(xì)胞培養(yǎng)在含有EGF和bFGF的無(wú)血清培養(yǎng)基中，能形成大量的神經(jīng)干細(xì)胞球，這些神經(jīng)干細(xì)胞球可在體外擴(kuò)增及傳代培養(yǎng)。免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定神經(jīng)干細(xì)胞球中大部分為Nestin表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。這些細(xì)胞球貼壁分化后可以出現(xiàn)NSE、GFAP和CNP表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞。膠質(zhì)瘤細(xì)胞系、組織中分

4、選出的CDl33陽(yáng)性細(xì)胞在上述條件下培養(yǎng)也出現(xiàn)呈球形聚集生長(zhǎng)，同神經(jīng)干細(xì)胞亦能多向分化。流式結(jié)果顯示腦腫瘤干細(xì)胞較神經(jīng)干細(xì)胞多處于增殖期。 【結(jié)論】從引產(chǎn)的人胚胎腦皮層分離出的細(xì)胞，在含有EGF和bFGF的無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，見(jiàn)到了具有自我更新能力和多向分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞，其含有CDl33陽(yáng)性細(xì)胞。膠質(zhì)瘤細(xì)胞系及手術(shù)組織中含有CDl33陽(yáng)性細(xì)胞，在與神經(jīng)干細(xì)胞相同的培養(yǎng)條件下，可以增殖和多向分化，具有干細(xì)胞特性。腦腫瘤干細(xì)胞的