心肌缺血-再灌注損傷中核受體LXR的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:闡明核受體LXR在心肌缺血/再灌注損傷中的作用及其分子機制。內(nèi)容:首先給予LXR激動劑觀察激活LXR在心肌缺血/再灌注損傷中的保護作用;其次深入研究激活LXR改善再灌注損傷的具體機制和信號通路;最后探討不同LXR亞型在心肌缺血/再灌注損傷中的作用。
　　方法:構(gòu)建小鼠心肌缺血/再灌注模型，將小鼠隨機分為假手術(shù)組、對照組、22(R)-HC組和GW3965組。對照組、22(R)-HC組和GW3965組分別給予腹腔注射藥物溶劑（二

2、甲亞砜）、22(R)-HC(20 mg/kg)和GW3965(20 mg/kg)。各組均于再灌注前15 min時給藥一次，觀察時間為4周的各組小鼠每天給藥一次。所有組小鼠均給予缺血30 min處理，然后分別在再灌注15 min時檢測磷酸化蛋白，再灌注3 hr時檢測細胞凋亡、氧化應(yīng)激、硝化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的指標，再灌注24 hr時檢測心梗面積和心功能，再灌注4周時檢測血流動力學、心功能和存活心肌。采用Westert Blot和熒光定量PCR

3、方法觀察LXR的表達變化，用TUNEL、Caspase-3活性方法檢測心肌細胞的凋亡，用病理染色、心臟超聲和PET-CT評估梗死心肌和心功能，用Caspase活性、Westert Blot、熒光定量PCR、免疫熒光、免疫組化、ELISA等方法及LXR基因敲除小鼠研究LXR的作用機制和不同亞型的功能差別。
　　結(jié)果:正常心肌組織中LXRα和LXRβ均有表達，但LXRα在缺血/再灌注過程中明顯上調(diào)而LXRβ無變化。給予LXR激動劑能明

4、顯減少細胞凋亡和梗死面積并改善收縮功能。進一步機制研究發(fā)現(xiàn)在心肌缺血/再灌注過程中激活LXR可以明顯改善心肌組織的氧化應(yīng)激、硝化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，通過減少促凋亡的p38 MAPK磷酸化和增加促進細胞存活的Akt、ERK的磷酸化信號通路抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源性細胞凋亡程序。在基因敲除小鼠中發(fā)現(xiàn)LXRα基因缺失使缺血/再灌注引起的氧化/硝化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)更嚴重并增強了p38 MAPK的活化，從而加劇缺血/再灌注損傷。不僅如此，LXR