桿狀病毒F蛋白的研究.pdf

1、F蛋白是桿狀病毒的一種重要膜蛋白，它分為Fa和Fb兩類。Fa是組Ⅱ NPV出芽病毒的膜蛋白，在桿狀病毒出芽和病毒感染傳播時可以替代GP64重要功能；Fb是組I NPV的跨膜蛋白， GP64被認(rèn)為在同源進(jìn)化上取代了Fb的功能。CbNPV(Clanis bilineata NPV)是本實驗室新發(fā)現(xiàn)的一種桿狀病毒；AcNPV(Autographa califionicaNPV)和BmNPV(Bombyx mori NPV)是組I NPV的典型

2、病毒。為了解Fa和Fb的性質(zhì)、特點和功能，探索Fa、Fb和GP64之間功能上的關(guān)系，本論文以這三種病毒為研究對象，通過分析基因序列、熒光定量PCR和GFP熒光蛋白示蹤等方法，對Fa、Fb和GP64蛋白進(jìn)行了初步研究。所得主要結(jié)論如下： 1．首次系統(tǒng)地分析了CbNPVFa基因,其讀碼框由2109個核苷酸組成，編碼702個氨基酸，分子質(zhì)量約為80.69 kDa。它具有早期和晚期的啟動子；有膜融合蛋白的結(jié)構(gòu)特點，這些特點與GP64蛋白

3、極為相似。 2．CbNPV F蛋白與幾種有代表性的Fa、Fb和GP64蛋白氨基酸序列同源性分析表明，CbNPV F蛋白與Fa的同源性在32.9-61.8％之間，其屬于Fa家族；CbNPV F蛋白與GP64及其與Fb的同源性均在20％以下，CbNPV F蛋白與兩者的親緣關(guān)系都較差。 3．系統(tǒng)地分析了已知基因組全序列的NPV的Fa、Fb和GP64的同源性，并作出系統(tǒng)進(jìn)化樹狀圖。分析表明，F(xiàn)a和Fb的同源性均在20％以下，雖然

4、兩者是同源蛋白，但功能可能差別很大。Fa與GP64和Fb與GP64的同源性都很低，表明在系統(tǒng)進(jìn)化上gp64與F基因的來源可能不同，gp64可能是來自外源基因。同時對它們早、晚期轉(zhuǎn)錄起始因子的分析顯示，F(xiàn)b、Fa和GP64都具有早、晚期啟動因子；Fb不是進(jìn)化上的冗余基因，而是有功能的基因。 4．熒光定量PCR和半定量PCR的方法研究AcNPV和BmNPVFb和gp64的表達(dá)情況表明：Fb不但是表達(dá)的，而且表達(dá)的量也呈有規(guī)律的變化，

5、證明Fb基因不是進(jìn)化的冗余基因，而是有功能的基因。Fb和gp64表達(dá)量的變化趨勢總體相似，但不同種類桿狀病毒的Fb相對于gp64的表達(dá)趨勢變化劇烈程度不同；gp64表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于Fb的表達(dá)量，并且相對于gp64，不同種類桿狀病毒的Fb的表達(dá)量也有較大差別。推測組I NPV中Fb蛋白和GP64蛋白的功能不相關(guān)，F(xiàn)b的功能與不同種類桿狀病毒本身的特性有關(guān)。 5．BmNPV Fb的啟動子只有在BmNPV病毒激活因子的作用下才能活化，并