鼠巨細(xì)胞病毒性耳聾新生小鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)接種小鼠巨細(xì)胞病毒（murine cytomegalovirus，MCMV），建立新生小鼠MCMV性耳聾模型，通過(guò)觀察耳蝸感染MCMV時(shí)間與各時(shí)間窗耳蝸形態(tài)改變、螺旋神經(jīng)節(jié)(spiral ganglion cell，SGN)細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)變化及SGN細(xì)胞凋亡，探討MCMV感染導(dǎo)致SGN細(xì)胞凋亡從而引起聽(tīng)力損傷的分子生物學(xué)機(jī)制，為今后進(jìn)一步的研究和臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將新生（出生24h內(nèi)）BALB

2、/C小鼠平均隨機(jī)分成兩組:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組采用顱內(nèi)注射MCMV懸液法（接種部位注射TCID50為104.15/0.1mL病毒懸液15μl）建立MCMV感染-聽(tīng)力損傷模型，對(duì)照組用同樣的注射方法注射無(wú)菌生理鹽水15μl觀察小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育和存活情況，在建模后的第1天，第3天，第5天，第7天，第14天和第21天分批處死小鼠，分別測(cè)定:1.在聲電屏蔽下檢測(cè)3周實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠ABRⅠ波波幅、閾值及潛伏期;2.通過(guò)光鏡觀察各時(shí)間窗小鼠耳蝸

3、組織病理學(xué)變化;3.MCMV-DNA PCR分析各時(shí)間窗小鼠耳蝸MCMV感染情況;4.運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各時(shí)間窗小鼠耳蝸SGN細(xì)胞Bcl-2、Bax基因蛋白質(zhì)的表達(dá);5.采用原位細(xì)胞凋亡(TUNEL)法檢測(cè)各時(shí)間窗小鼠耳蝸SGN細(xì)胞凋亡的情況。
　　結(jié)果：1.對(duì)照組的小鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好（皮毛光滑，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)好），實(shí)驗(yàn)組的小鼠生長(zhǎng)發(fā)育緩慢（皮毛凌亂稀疏、睜眼延遲、反應(yīng)略遲鈍、活動(dòng)差、體態(tài)略消瘦）;2.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠相比AB

4、RⅠ波潛伏期延長(zhǎng)、波幅降低、閾值升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;3.光鏡下實(shí)驗(yàn)組小鼠建模后3天，耳蝸即出現(xiàn)鼓階明顯充血，并伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn);建模后第7天螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列稀疏，細(xì)胞間隙變寬，并一直持續(xù)至注射后第21天，對(duì)照組小鼠耳蝸均無(wú)上述變化;4.實(shí)驗(yàn)組建模后1天MCMV-DNA PCR檢測(cè)陰性，其余各時(shí)間點(diǎn)MCMV-DNA PCR檢測(cè)為陽(yáng)性;對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)MCMV-DNA PCR檢測(cè)為陰性;5.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，Bcl-

5、2表達(dá)降低，Bax表達(dá)升高，Bcl-2/Bax比值降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;6.實(shí)驗(yàn)組從建模后第3天起，平均細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），建模后1周為其AI高峰。
　　結(jié)論：新生乳鼠顱內(nèi)注射MCMV后可促使SGN細(xì)胞發(fā)生凋亡，高峰約在建模后1周左右，其作用機(jī)制可能是通過(guò)激活JNK信號(hào)途徑非核通路，下調(diào)Bcl-2，上調(diào)Bax來(lái)促使螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)生