丹參酮ⅡA和小檗堿誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡及對MMP-1和TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肝纖維化是以肝內(nèi)纖維組織異常增生為病理過程的慢性肝臟損害，是肝硬化的必經(jīng)過程。目前國內(nèi)外學(xué)者一致認(rèn)為肝纖維化的中心環(huán)節(jié)是肝星狀細(xì)胞(HSC)的激活，膠原合成增多所致，而HSC是肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要來源，因此誘導(dǎo)HSC凋亡可作為抗肝纖維化的策略之一。本實(shí)驗(yàn)旨在通過觀察丹參酮ⅡA和小檗堿誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6凋亡及對MMP-1、TIMP-1表達(dá)的影響，探討肝纖維化的發(fā)生機(jī)制及其抗肝纖維化治療的途徑。
　　 方

2、法：選擇體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)作為研究對象，通過四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)篩選丹參酮ⅡA和小檗堿最適藥物濃度，選擇細(xì)胞存活率為90％以上的濃度為工作濃度；分為三組：對照組、丹參酮ⅡA組和小檗堿組；免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測HSC-T6細(xì)胞α-SMA、Ⅰ型膠原的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清TGF-β1含量；HE染色觀察HSC-T6細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及各細(xì)胞周期所占比例；逆轉(zhuǎn)

3、錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測各組細(xì)胞中MMP-1、TIMP-1mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.MTT實(shí)驗(yàn)顯示：丹參酮ⅡA濃度為1.5mg；L時(shí)細(xì)胞存活率分別為93.9％、小檗堿濃度為20μmol/L時(shí)細(xì)胞存活率為96.8％，故選擇丹參酮Ⅱ1.5mg/L、小檗堿20μmol/L作為藥物的工作濃度。2.HSC-T6細(xì)胞具有HSC活化表型，表達(dá)α-SMA、Ⅰ型膠原，經(jīng)丹參酮ⅡA和小檗堿處理后其α-SMA、Ⅰ型膠原表達(dá)減少

4、。3.經(jīng)工作濃度的丹參酮ⅡA和小檗堿分別作用24小時(shí)后，其培養(yǎng)液上清TGF-β1含量均較對照組降低(P＜0.05)。4.HE染色顯示丹參酮ⅡA組和小檗堿組細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)致密，并可見凋亡小體。5.HSC-T6細(xì)胞正常情況下存在凋亡，但丹參酮ⅡA和小檗堿組凋亡率較對照組明顯增高(P＜0.01)，且G0/G1期細(xì)胞增加。6.HSC-T6細(xì)胞可表達(dá)MMP-1、TIMP-1mRNA，加入丹參酮ⅡA(1.5mg/L)和小檗堿(20μmol/L)