卵葉娃兒藤生物堿的提取及其活性功能研究.pdf

1、卵葉娃兒藤是我國傳統(tǒng)的有毒藥用植物，在我國醫(yī)學(xué)中很早就已經(jīng)臨床使用，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，卵葉娃兒藤中的生物堿成分具有抗腫瘤作用，因此對其生物堿類化合物的研究具有重要的科學(xué)價值，為卵葉娃兒藤的藥理活性，藥效試驗(yàn)研究及天然保健和治療藥物的開發(fā)提供理論與物質(zhì)基礎(chǔ)?，F(xiàn)將主要研究結(jié)果概述如下： 1.應(yīng)用現(xiàn)代食品分析技術(shù)，對卵葉娃兒藤的基本理化成分進(jìn)行了分析，結(jié)果為(g/100g，干重)：水分含量為9.44；灰分含量為6.30；總糖含量為2.

2、67；粗纖維含量為17.03；蛋白質(zhì)含量為14.20；脂肪含量為11.32。對卵葉娃兒藤SFE-CO<,2>萃取物采用氣-質(zhì)連用(GC-MS)技術(shù)進(jìn)行成分分析，主要成分為Hexadecanoicacid，ethyl ester(十六酸乙酯)、n-Hexadecanoic acid(十六酸)、Hexadecanoicacidmethyl ester(十六酸甲酯)、2-Nitro-4-(triftuoromethyl)phenol(2-硝基

3、-4-(三氯甲基)-苯酚)、8-Methoxy-2-methylquinoline(8-甲氧基-2-甲基喹啉)、1-(12-methyl-1-oxotetradecyl)-1-Pyrrolidine(12-甲基-1-十四烷?；?-吡咯烷、1-Phenyl-1-azaspiro[4，5]decane(1-苯基-1-氮雜螺[4，5]庚烷)等。 2.將溴酚藍(lán)酸性染料比色法用于卵葉娃兒藤總生物堿的測定。通過對比色條件進(jìn)行優(yōu)化得到最佳條件

4、：加入pH值為4.2的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液4.0 mL，溴酚藍(lán)染料1.5 mL，用12 mL氯仿萃取。結(jié)果表明，該測定方法精密度高，在60 min內(nèi)顯色穩(wěn)定，操作簡單，是一種快速測定卵葉娃兒藤總生物堿的有效方法。 3.對溶劑法、微波輔助萃取法和超臨界流體萃取法提取卵葉娃兒藤總生物堿的工藝分別進(jìn)行了研究。 確立了溶劑法最佳工藝條件為：乙醇濃度90％、固液比1：25、提取溫度90℃、提取2次、每次2h。卵葉娃兒藤總生物

5、堿的提取率可達(dá)0.386％。各提取因素對總生物堿提取率的影響程度由大到小依次為：溫度>乙醇濃度>固液比>提取次數(shù)。 首次將超臨界CO<,2>萃取技術(shù)用于卵葉娃兒藤生物堿的提取研究。通過考察夾帶劑(乙醇)濃度、萃取溫度、壓力和萃取時間等影響因素，得出總生物堿的最佳提取工藝參數(shù)分別為：80％乙醇作為夾帶劑、在溫度50℃、壓力25 MPa的條件下提取90分鐘。超臨界提取各因素對總生物堿提取率的影響大小順序依次為：提取溫度>提取時間>夾

6、帶劑濃度>提取壓力。卵葉娃兒藤總生物堿的提取率為0.249％，低于溶劑法提取，但雜質(zhì)含量低。確立了微波輔助提取法最佳工藝條件為：乙醇濃度90％、固液比1：20、提取溫度90℃、提取2次、每次15分鐘。卵葉娃兒藤總生物堿的提取率可達(dá)0.436％。各提取因素對總生物堿提取率的影響程度由大到小依次為：溫度>乙醇濃度>固液比>提取時間。微波輔助提取法產(chǎn)率高于溶劑法提取和超臨界流體萃取。 4.利用現(xiàn)代分析技術(shù)，建立了LC-MS分析卵葉娃兒

7、藤中生物堿成分的定性方法。為以后在沒有標(biāo)準(zhǔn)對照品的情況下進(jìn)行分析、研究及定性檢測植物樣品中的生物堿成分提供了科學(xué)依據(jù)。 5.采用硅膠柱色譜純化了卵葉娃兒藤總生物堿。得到兩個化合物，經(jīng)過對其UV、IR、ESI-MS、EI-MS、<'1>H-NMR.和<'13>C-NMR色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，鑒定出兩種新的化合物，均是首次從卵葉娃兒藤中得到。 6.采用MTT法分析化合物1和化合物2抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用，細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)表明化合物1和化