大鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝細(xì)胞增殖、凋亡及功能的影響.pdf

1、目的：
　　探討肝衰竭大鼠血清對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UMSCs)表面免疫學(xué)標(biāo)記CD86的影響。了解UMSCs對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞增殖、凋亡與功能的影響。
　　方法：
　　采用膠原酶和胰酶兩步法分離UMSCs,采用貼壁法培養(yǎng)、純化;觀察細(xì)胞形態(tài)特征及生長狀態(tài);流式細(xì)胞儀檢測(cè)UMSCs細(xì)胞表面分子標(biāo)記CD90、CD105;將達(dá)70％~80％融合的第3代UMSCs隨機(jī)分為正常培養(yǎng)基組,正常血清組(含10％正常大鼠血清培養(yǎng)基),肝衰

2、竭血清組(含10％肝衰竭大鼠血清培養(yǎng)基)。以上措施干預(yù)培養(yǎng)24 h后用流式細(xì)胞儀定量監(jiān)測(cè)細(xì)胞表面免疫學(xué)標(biāo)記CD86的變化。用膠原酶灌注法分離大鼠肝細(xì)胞,肝細(xì)胞與UMSCs應(yīng)用Transwell共培養(yǎng)。原代大鼠肝細(xì)胞分為三組:UMSCs組、大鼠原代肝細(xì)胞組及UMSCs與大鼠原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)組,分別于共培養(yǎng)第1d、3d、5d、7d通過MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力;UMSCs與肝細(xì)胞共培養(yǎng)組、肝細(xì)胞組,采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡,于共

3、培養(yǎng)24h后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;收集各組細(xì)胞共培養(yǎng)第1d、3d、5d培養(yǎng)上清液,ELISA法檢測(cè)上清液中白蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1.采用膠原酶和胰酶兩步酶法能獲得大量的單個(gè)UMSCs,在體外可以穩(wěn)定的生長、擴(kuò)增。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,分離得到的細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)相關(guān)抗原標(biāo)記CD90、CD105,表達(dá)率為99.7％、99.5％。2.不同組誘導(dǎo)培養(yǎng)UMSCs24小時(shí)后,正常培養(yǎng)基組、正常血清組,肝衰竭血清組細(xì)胞表面C

4、D86表達(dá)率為0.5％,0.6％,0.4％。相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.(1)UMSCs與原代大鼠肝細(xì)胞共培養(yǎng)組在第1d、3d、5d、7d的OD值大于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的UMSCs組OD值與原代大鼠肝細(xì)胞組OD值之和(P<0.05)。(2)誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組及UMSCs密度為1*104/ml、1*106/ml與肝細(xì)胞共培養(yǎng)組凋亡率分別為93.3％、54.2％、59.7％、72.9％,相比差異有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)UMSCs無白蛋白分泌能力, UMSCs與大鼠原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)組培養(yǎng)上清液中白蛋白水平第1d、3d、5d均較原代大鼠肝細(xì)胞組明顯升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　膠原酶和胰酶兩步消化法是一種簡單、可靠的分離UMSCs的方法;大鼠UMSCs穩(wěn)定表達(dá)相關(guān)抗原標(biāo)記CD90、CD105。經(jīng)肝衰竭大鼠血清干預(yù)培養(yǎng)UMSCs后CD86仍不表達(dá)。UMSCs在體外可以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖,抑制其凋亡,并具有增