丙戊酸增強(qiáng)人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COC1-DDP對順鉑敏感性的研究.pdf

1、研究背景、目的：
　　 化療耐藥是目前惡性腫瘤治療中急需解決的難題。卵巢癌對化療的耐藥性是影響卵巢癌患者五年生存率的一個重要因素。不少逆轉(zhuǎn)劑(如維拉帕米、三苯氧胺等),由于達(dá)到逆轉(zhuǎn)作用時所需的劑量對人體產(chǎn)生明顯的毒副作用,因此限制了它們的臨床應(yīng)用。國外報道組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histon-deacetylaseinhibitors,HDACIs)具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、細(xì)胞周期阻滯和凋亡,逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移性腫瘤的惡性表型,以及增強(qiáng)放化

2、療敏感性等生物學(xué)效應(yīng)。HDACIs對放化療增敏作用的機(jī)制非常復(fù)雜,至今還未完全闡明。丙戊酸(valproic acid,VPA)是臨床上被廣泛應(yīng)用的廣譜抗癲癇藥,最近發(fā)現(xiàn)其具有抑制HDAC活性的作用,因其半衰期長、生物利用度高、有效血藥濃度低、毒副作用小等優(yōu)點,而顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。本研究旨在探討丙戊酸是否可以增強(qiáng)卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP對順鉑的敏感性并初步探討其增敏的可能機(jī)制,并為臨床用藥提供理論指導(dǎo)。
　　 方法

3、
　　 本實驗選取人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COCl/DDP作為實驗研究對象,采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方式,實驗時選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。設(shè)立對照組、單用順鉑組、順鉑與丙戊酸聯(lián)合組;倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;以WST-1為指標(biāo)檢測不同藥物處理前后人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COCl/DDP的增殖變化情況;流式細(xì)胞儀分析不同藥物處理前后細(xì)胞的凋亡情況;免疫細(xì)胞化學(xué)分析法分析不同藥物處理前后NF-κB P65的表達(dá)情況。實驗所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13

4、.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,P∠0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義,統(tǒng)計方法使用單因素方差分析和t檢驗。
　　 結(jié)果
　　 不同藥物處理人卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:對照組細(xì)胞生長狀態(tài)良好,順鉑組細(xì)胞數(shù)目減少,胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,體積縮小,丙戊酸聯(lián)合順鉑組細(xì)胞數(shù)目減少更加明顯,視野內(nèi)可見懸浮團(tuán)簇狀的凋亡細(xì)胞;WST-1增殖抑制實驗顯示:作用24、48、72小時后丙戊酸與順鉑聯(lián)合用藥細(xì)胞生長抑制率分別

5、為(73.25±11.39、82.13±0.72、97.77±1.05)％明顯強(qiáng)于單用順鉑組(44.76±2.15、71.64±3.98、93.32±1.98)％,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示丙戊酸與順鉑聯(lián)合組的凋亡率為(48.50±5.428)％明顯高于順鉑單用組凋亡率(23.27±1.93)％,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);免疫細(xì)胞化學(xué)分析法顯示:單用順鉑組NF-κB P65的陽性表達(dá)率8

6、0％明顯高于對照組NF-κB P65的陽性表達(dá)率20％,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),表明順鉑可以激活NF-κB,從而產(chǎn)生化療耐藥。丙戊酸與順鉑聯(lián)合組NF.K B P65的陽性表達(dá)率為10％明顯低于單用順鉑組NF-κBP65的陽性表達(dá)率80％,且兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),表明丙戊酸可以抑制NF-κB的激活,一定程度上逆轉(zhuǎn)人卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP對順鉑的耐藥性。
　　 結(jié)論
　　 組蛋白