三個(gè)先天性白內(nèi)障家系致病基因的鑒定.pdf

1、研究目的:通過對(duì)三個(gè)先天性白內(nèi)障家系(CAT-001、CAT-002和CAT-003家系)進(jìn)行候選致病基因的排查,以尋找其致病基因及其突變位點(diǎn),明確該三個(gè)家系的致病分子基礎(chǔ)。
　　研究方法:將患有先天性白內(nèi)障的三個(gè)家系納入研究,對(duì)所有成員進(jìn)行全面的眼部檢查,明確其先天性白內(nèi)障表型;采集這些家系成員的外周靜脈血,采用Wizard Genomic DNA Purification試劑盒從外周靜脈血中提取及純化基因組DNA;以家系先證者

2、基因組DNA為模板,聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增10個(gè)白內(nèi)障候選致病基因的突變熱點(diǎn)區(qū)域,PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行直接DNA測(cè)序篩查突變位點(diǎn)。一旦發(fā)現(xiàn)可疑突變位點(diǎn),則采用直接DNA測(cè)序的方法在其他家系成員進(jìn)行疾病與致病突變共分離分析,進(jìn)一步確認(rèn)其是否為致病性突變位點(diǎn)。
　　研究結(jié)果:先天性白內(nèi)障三個(gè)家系CAT-001、CAT-002、CAT-003的發(fā)病率明顯高于一般人群,每代均有患者且無性別分布上的差異,因此確定此三個(gè)家系的遺傳方式為常

3、染色體顯性遺傳。CAT-001家系患者的表型為先天性核性白內(nèi)障,在該家系患者的CRYGD基因第2個(gè)外顯子上存在一些雜合性突變c.C70A,該突變?yōu)殄e(cuò)義突變,導(dǎo)致一個(gè)CRYGD蛋白第24位的脯氨酸被蘇氨酸取代(p.P24T);CAT-002家系患者的表型為先天性繞核性白內(nèi)障,在該家系患者的CRYBA1基因第3個(gè)外顯子上存在剪接突變CRYBA1(IVS3+1G>A),使hnRNA的剪切和拼接異常,引起-A1晶狀體蛋白結(jié)構(gòu)異常而導(dǎo)致先天性白內(nèi)

4、障的發(fā)生;CAT-003家系患者的表型為先天性核性白內(nèi)障,在該家系患者的CRYBA1基因編碼序列第272-274位上缺失3個(gè)堿基GAG,故其所編碼肽鏈第91位甘氨酸丟失(p.G91del),蛋白結(jié)構(gòu)及功能因此改變而發(fā)病。
　　研究結(jié)論:先天性白內(nèi)障家系CAT-001遺傳方式為常染色體顯性遺傳,其表型為先天性核性白內(nèi)障,CRYGD(p.P24T)錯(cuò)義突變是CAT-001家系的致病分子基礎(chǔ);先天性白內(nèi)障家系CAT-002遺傳方式為常染