尾加壓素Ⅱ刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、背景和目的:尾加壓素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,UⅡ)是一具有生長抑素樣結(jié)構(gòu)的環(huán)肽,廣泛存在于從軟體動物到哺乳動物體內(nèi),主要分布于神經(jīng)和心血管組織。其特異性受體為GPR14,亦稱UT,主要分布于心血管組織。UⅡ收縮活性超過內(nèi)皮素-1,是目前哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的收縮活性最強的血管活性肽。UⅡ還可促進細(xì)胞增殖,成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變、合成膠原和遷移。研究表明,UⅡ參與了許多心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展,在充血性心衰、原發(fā)性高血壓、心肌梗死、糖尿病心肌病

2、和再狹窄患者或動物模型上,心血管組織UⅡ及其受體UT表達上調(diào)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),UⅡ可加速異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌肥大與纖維化過程;其他學(xué)者發(fā)現(xiàn),UT阻斷劑可改善缺血性心臟病大鼠心功能、減輕纖維化進展,提示UⅡ在心肌纖維化過程中發(fā)揮重要作用。最近研究表明,內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)是心肌纖維化發(fā)生和發(fā)展的重要機制之一。然而,UⅡ在EndMT轉(zhuǎn)化中的作用尚不清

3、楚。為此,本工作在體外培養(yǎng)的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)上,觀察了UⅡ誘導(dǎo)EndMT的作用,并初步探討了該效應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　方法:心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用原代細(xì)胞培養(yǎng)法,取SD乳鼠(1-4天),分離心臟,胰酶消化、分離培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,實驗采用5-8代細(xì)胞。以細(xì)胞α-SM-actin(α-SMA)的表達上調(diào),同時VE-cadher

4、in表達下調(diào)作為EndMT轉(zhuǎn)化標(biāo)志。待細(xì)胞長至80％左右融合時,無血清培養(yǎng)24h,以10-8mol/l的UⅡ處理24-48h,收集細(xì)胞、提取蛋白,用Western印跡法檢測α-SMA和VE-caherin表達。另取細(xì)胞,用信號通道阻斷劑包括絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)抑制劑PD98059(10-5mol/l)和蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)抑制劑

5、H7(10-5mol/l)預(yù)先處理30min,再和UⅡ(10-8mol/l)共孵育48h,用Western印跡法檢測α-SMA和VE-cadherin表達。
　　結(jié)果:UⅡ能夠誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞α-SMA表達上調(diào),同時VE-cadherin表達下調(diào)。用10-8mol/l的UⅡ刺激細(xì)胞24h和48h后,α-SMA表達分別較對照組增加增加20%(p>0.05)和139.5%(p<0.05);同時VE-cadherin表達較對照組分

6、別減少40.59%(p<0.01)和62.75%(p<0.01)。該作用能夠被PD98059和H7減弱,其中α-SMA表達較單純UⅡ刺激組分別減少35.2%(p<0.05)和49.59%(p<0.01),而VE-cadherin分別上升88.41%(p<0.01)和63.08%(p<0.01)。
　　結(jié)論:UⅡ能夠促進心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,該作用可能通過MAPK和PKC信號途徑來實現(xiàn),提示UⅡ有可能通過誘導(dǎo)EndMT作