藥用植物基因組DNA提取及鐵皮石斛RAPD反應(yīng)體系的優(yōu)化.pdf

1、隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)在藥用植物學(xué)領(lǐng)域日益滲透，在分子水平上檢測(cè)基因多態(tài)性分子標(biāo)記的中藥鑒定方法得到不斷的發(fā)展與應(yīng)用，新方法、新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，其中，RAPD技術(shù)由于其操作簡(jiǎn)便、快速、省時(shí)、省力，自問(wèn)世以來(lái)一直很受歡迎，并迅速在動(dòng)植物藥材品種鑒定、原植物的種屬特異性研究、易混淆品種的鑒別、藥材的道地性研究等方面都取得了很大進(jìn)展。 以采自四川峨眉山的13種藥用植物為材料，在傳統(tǒng)SDS-KAc提取方法中的KAc除去變性

2、蛋白這一步驟后，用“酚:氯仿”抽提上清2～3次，而后在核酸沉淀過(guò)程中，利用共沉淀差異，快速鉤取核酸絮狀物有效地除去多糖、酚類物質(zhì)對(duì)核酸的污染。用該法提取的藥用植物DNA質(zhì)量高，經(jīng)電泳檢測(cè)，DNA無(wú)降解，RAPD-PCR和酶切鑒定說(shuō)明該法所提的DNA能夠滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。 采用改良的SDS法提取鐵皮石斛基因組DNA，A260/A280為1．8-2．0之間，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)其完整性較好，無(wú)降解。以此DNA為模板考察了dNTPs