重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、腸出血性大腸桿菌(EHEC)是世界上食源性疾病的重要誘因。人類感染EHEC具有潛在的重大威脅并可能引起一系列的并發(fā)癥，包括腹瀉、出血性腸炎(HC)、溶血性尿毒綜合征(HUS)等。EHEC的血清型很多，O157：H7是與人類疾病相關(guān)的最常見的血清型。該菌已經(jīng)在世界上引起多次爆發(fā)。我國江蘇、安徽兩省曾于1999和2000年發(fā)生大腸桿菌O157：H7感染性腹瀉爆發(fā)流行，并且范圍擴(kuò)大東北、華北及華東地區(qū)。由該菌引起的疾病已成為21世紀(jì)嚴(yán)重威脅人

2、類生命和健康的傳染病，因此對該菌進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，查明該菌的傳染源、傳播途徑和傳播范圍，為該病的預(yù)防和治療提供科學(xué)依據(jù)具有重要的意義。 1.大腸桿菌O157的分離鑒定與表型特征分析目的了解重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的家畜帶菌情況及其生化特性和對抗菌藥物的敏感性。方法采集重慶市六個(gè)區(qū)縣家畜糞便和污水樣品1504份，接種mEC+n增菌肉湯，37℃振搖孵育6h，取增菌液接種CT-SMAC平板，37C培養(yǎng)18h，挑取可疑菌落，經(jīng)血

3、清學(xué)檢驗(yàn)、PCR擴(kuò)增和微量生化實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，最后用藥敏試紙測試其對常用抗生素的敏感性。結(jié)果在1504份樣品中共檢出11株O157，其中O157：H77株，O157：H?4株；對分離菌株做藥物敏感性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它們對青霉素、氨芐西林、桿菌肽、頭孢呋肟、紅霉素、慶大霉素、四環(huán)素等存在不同程度的耐藥。結(jié)論本次調(diào)查是首次對重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的家畜帶菌情況進(jìn)行較全面的調(diào)查，查明了該菌的傳染源，對菌株的表型特征進(jìn)行了研究。 2.大腸

4、桿菌O157毒力與黏附相關(guān)基因的檢測目的了解分離菌株攜帶毒力及黏附相關(guān)基因的情況。方法用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增stx1、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因。結(jié)果所有O157：H7菌株擴(kuò)增出eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因，但沒有擴(kuò)增出stx1和stx2基因；4株O157：H?菌株，均沒有擴(kuò)增出stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因，且只有BYY119擴(kuò)增出stx1基因。結(jié)論由于所有菌株缺失stx2基

5、因，重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157致病力相對較低。 3.腸出血性大腸桿菌O157：H7的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析目的從基因水平了解分離菌株的多態(tài)性。方法選用限制性內(nèi)切酶HincⅡ和EcoRⅡ?qū)Ψ蛛x的O157：H7菌株eaeA基因進(jìn)行酶切，選用限制性內(nèi)切酶HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRⅡ和RsaⅠ對分離的O157：H7菌株ehxA基因進(jìn)行酶切，最后對這兩個(gè)基因進(jìn)行PCR-RFLP分析。結(jié)果所有分

6、離菌株的eaeA基因和ehxA基因選用限制性內(nèi)切酶酶切之后所得酶切片段數(shù)目和大小與標(biāo)準(zhǔn)菌株的eaeA基因和ehxA基因選用限制性內(nèi)切酶酶切之后所得酶切片段數(shù)目和大小相同。結(jié)論重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157：H7在基因水平較為保守，多態(tài)性較為單一。 4.產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)stx2a和stx2b血清抗體的檢測目的了解重慶市及三峽庫區(qū)STEC攜帶stx2基因的情況。方法在兩個(gè)屠宰場采集商品豬血清415份，新橋醫(yī)院采集健康

7、人群血清535份，多家奶牛場新鮮牛奶326份，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗體。結(jié)果用P/N＞2.1作為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，415份商品豬血清檢測到stx2a抗體陽性血清4份(0.96﹪)，stx2b抗體陽性血清2份(0.48﹪)；535份健康人群血清檢測到stx2a抗體陽性和stx2b抗體陽性血清各21份(3.93﹪)；326份新鮮牛奶檢測到stx2a抗體陽性血清25份(7.46﹪)，stx2b