慢性乙型肝炎免疫耐受和免疫清除期淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的差異.pdf

1、目的: 乙型肝炎病毒（HBV）是導(dǎo)致肝臟疾病的主要致病因子，許多的慢性乙型肝炎患者最終可發(fā)展成為肝硬化和原發(fā)性肝癌。迄今為止，乙型肝炎的發(fā)病機(jī)理和HBV引發(fā)免疫耐受的機(jī)制尚未完全闡明。本課題研究慢性乙型肝炎患者免疫耐受期和免疫清除期體內(nèi)淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的差異，探討差異表達(dá)基因與HBV感染引起的免疫耐受及免疫清除的關(guān)系。 方法: 選擇慢性乙型肝炎（HBsAg、HBeAg、HBcAb陽性）病例，根據(jù)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

2、（ALT）高低劃分免疫耐受組、免疫清除組：以健康查體者為正常對(duì)照組。采集新鮮血液，EDTA抗凝，淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞，一步法提取總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記cDNA探針，熒光染料Cy3標(biāo)記正常對(duì)照組，Cy5標(biāo)記免疫耐受組和免疫清除組。采用高通量基因表達(dá)譜芯片（7，267個(gè)基因）進(jìn)行芯片雜交，使用ScanArray Express共聚焦掃描儀掃描基因芯片，PerkinElmer LAS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果: 比較免疫

3、耐受組與正常對(duì)照組發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因419個(gè)，表達(dá)上調(diào)206個(gè)，下調(diào)213個(gè)；免疫清除組與免疫耐受組差異表達(dá)基因共213個(gè)，上調(diào)111個(gè)，下調(diào)102個(gè)；兩組共有但差異表達(dá)方向相反的基因47個(gè)，在免疫耐受期表達(dá)下調(diào)但免疫清除期上調(diào)6個(gè)，在免疫耐受上調(diào)免疫清除期下調(diào)41個(gè)。 結(jié)論: 使用表達(dá)譜基因芯片檢測慢性乙型肝炎患者免疫耐受、免疫清除期淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)，結(jié)合HBV感染的自然史，初步建立了HBV免疫耐受及免疫清除發(fā)生時(shí)淋巴