環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖對牙周組織再生的影響.pdf

1、目的：本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CsA(Cyclosporine A，CsA)與牙齦卟啉單胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide，Pg-LPS)聯(lián)合作用在促進牙齦成纖維細胞（gingival fibroblasts，GFs）的增殖、分泌轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）上具有協(xié)同作用；在動物試驗中也發(fā)現(xiàn)炎癥可以促進CsA的牙齦增生作用。這種協(xié)同促進作用是否僅存在于牙齦，能否在體外促進牙

2、周韌帶成纖維細胞（periodontal ligament fibroblasts，PDLFs）增殖，體內(nèi)促進牙周組織再生未見報道。因此本實驗擬觀察CsA聯(lián)合Pg-LPS對PDLFs增殖情況和生物學(xué)活性的影響。通過大鼠牙周局部注射CsA、LPS，研究CsA聯(lián)合LPS對大鼠牙周組織的影響；在此基礎(chǔ)上建立SD大鼠下頜骨缺損的動物模型，觀察CsA聯(lián)合LPS對動物模型牙周組織缺損修復(fù)情況的作用。
　　方法：1.體外觀察不同濃度的CsA(1

3、0ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL)和LPS(10ng/mL，100ng/mL，1000ng/mL)對人PDLFs增殖的影響。2.選取CsA100 ng/mL+ LPS100 ng/mL，CsA100 ng/mL+LPS1000 ng/mL觀察二者聯(lián)合應(yīng)用對人PDLFs增殖的影響。3.體外通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time fluorescence quantitative polymera

4、se chain reaction, Realtime PCR）、考馬斯亮藍染色、ELISA、Von Kossa染色等方法比較含CsA100ng/mL，LPS100ng/mL，CsA100 ng/mL+LPS100ng/mL的不同培養(yǎng)液對人PDLFsⅠ、Ⅲ型膠原基因表達、總蛋白量、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、骨形成蛋白-2（Bone morphogenetic protein-2，BMP-2）、礦化結(jié)

5、節(jié)的形成等各種生物學(xué)功能的影響。4.在SD大鼠下頜骨第一磨牙頰側(cè)局部注射CsA2mg/k g及不同濃度的LPS(10，1，0.1μg)，30 d后HE染色觀察大鼠牙齦、牙槽骨的變化。5.人工構(gòu)建SD大鼠牙周缺損模型，缺損對應(yīng)口腔內(nèi)局部注射 CsA2mg/kg、CsA2mg/kg+LPS1μg，30d后取材，HE染色觀察低劑量CsA單獨應(yīng)用及聯(lián)合低劑量LPS應(yīng)用對大鼠牙周缺損再生的影響。
　　結(jié)果：1.不同濃度的CsA組中只有CsA

6、100ng/mL具有促人PDLFs增殖的作用，高濃度LPS（1000ng/mL）會抑制PDLFs的增殖，中、低濃度LPS（100,10ng/mL）對細胞的增殖沒有影響。2. CsA100ng/mL+LPS100ng/mL聯(lián)合作用對人PDLFs的增殖沒有影響，CsA100ng/mL+LPS1000ng/mL聯(lián)合作用會抑制細胞的增殖。3. CsA100ng/mL+ LPS100ng/mL，CsA100 ng/mL組的堿性磷酸酶(alkali

7、ne phosphatase, ALP)、骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)表達量高于陰性對照組，礦化結(jié)節(jié)形成的時間也短于陰性對照組；CsA100ng/mL促進人PDLFs總蛋白量的合成，CsA100 ng/mL+LPS100ng/mL對細胞總蛋白量的合成沒有影響；Resltime PCR檢測結(jié)果顯示CsA100ng/mL、CsA100ng/mL+LPS100ng/mL組人PDLFsⅠ型

8、膠原的表達量高于陰性對照組，但是會降低Ⅲ型膠原的表達。4. CsA2mg/kg局部注射不會引起牙齦增生，也不會引起牙槽脊高度的降低；LPS局部注射對牙齦沒有影響，但是LPS10μg會引起下頜骨牙槽脊高度的降低；5. CsA2mg/kg單獨及聯(lián)合低劑量LPS，對大鼠缺損的修復(fù)沒有影響，既無促進作用，也不會抑制。
　　結(jié)論：一定劑量的CsA具有促進PDLFs增殖、合成及分化能力，與低濃度的LPS聯(lián)合應(yīng)用對促進PDLFs的體外礦化具有一