連續(xù)性血液凈化對凝血纖溶因子影響及其機(jī)制的臨床與實驗研究.pdf

1、背景：連續(xù)性血液凈化(CBP)是近年來迅速發(fā)展起來的治療多臟器功能障礙綜合征(MODS)的有效手段。但MODS患者多存在內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，分泌凝血纖溶因子異常，白細(xì)胞、血小板及凝血因子激活，導(dǎo)致凝血與抗凝平衡破壞，表現(xiàn)為促凝活性增加、抗凝活性減少、纖溶系統(tǒng)受抑等。凝血系統(tǒng)過度激活最終引起凝血因子消耗和出血傾向，進(jìn)一步發(fā)展成彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)。在CBP治療過程中，血液與循環(huán)回路材料接觸，激活凝血因子，啟動凝血級聯(lián)反應(yīng)。同時，CBP治

2、療能有效清除體內(nèi)毒素、細(xì)胞因子等物質(zhì)，凝血纖溶系統(tǒng)發(fā)生復(fù)雜變化。在臨床中發(fā)現(xiàn)MODS患者在進(jìn)行CBP治療后，很多患者的凝血紊亂得以糾正，高凝狀態(tài)改善，但出血并發(fā)癥仍是常見的并發(fā)癥之一，即使采用無肝素CBP，仍有部分患者出現(xiàn)出血現(xiàn)象。研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞活躍地參與凝血纖溶平衡的調(diào)節(jié)，分泌許多與凝血、纖溶有關(guān)的物質(zhì)，可能在連續(xù)性血液凈化過程中對凝血纖溶系統(tǒng)影響起著重要作用，CBP對管內(nèi)皮細(xì)胞及凝血纖溶因子的影響研究甚少。本課題通過研究MOD

3、S患者在連續(xù)性血液凈化過程中組織因子(TF)、組織因子途徑抑制物(TFPI)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)等凝血纖溶因子與腫瘤壞死因子α(TNF α)、白介素1 β(IL-1 β)等細(xì)胞因子的變化規(guī)律及其相互關(guān)系，同時研究MODS患者在CBP治療過程不同時間點血清對血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌TF及PAI-1的影響以及肝素的作用，以明確CBP對凝血纖溶因子的影響及其機(jī)制。 目的：在臨床條件下，從體內(nèi)、外探討連續(xù)性血液凈化對凝血纖溶

4、因子的影響及其機(jī)制。 方法： 1、16例確診的MODS患者，8例行標(biāo)準(zhǔn)的CBP，以肝素抗凝，8例存在出血傾向者給予無肝素CBP。在CBP治療前、治療后15min、60min、120min及480min采血，分為兩部分，一份加入到枸椽酸鈉抗凝的試管離心后分離血漿，一份加入至無菌試管離心后分離無菌血清。并取10名健康志愿者的血標(biāo)本作為正常對照，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿組織因子(TF)、組織因子途徑抑制物(TFPI

5、)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)、D-二聚體(D-dimer)及血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平。 2、以CBP治療的MODS患者不同時間點血清干預(yù)培養(yǎng)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),I期凝固法檢測內(nèi)皮細(xì)胞組織因子活性,ELISA法檢測TF及PAI-1的蛋白含量,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測內(nèi)皮細(xì)胞TF、PAI-lmRNA表達(dá)。不同濃度TNFα干預(yù)血管內(nèi)皮細(xì)胞,工期凝固

6、法檢測內(nèi)皮細(xì)胞組織因子活性,ELISA法測定TF、PAI-1蛋白含量。 3、不同濃度肝素干預(yù)HUVEC,ELISA測定TF、TFPI及PAI-1蛋白含量,RT-PCR法檢測TF、TFPI及PAI-lmRNA表達(dá)。 結(jié)論： 1．MODS患者表現(xiàn)為高凝繼發(fā)纖溶亢進(jìn)狀態(tài)，連續(xù)性血液凈化治療后可改善凝血紊亂狀態(tài)，也可能成為部分患者治療后發(fā)生出血的原因，即使無肝素抗凝CBP也有可能加重和／或出現(xiàn)出血并發(fā)癥。 2．炎

7、癥因子可影響內(nèi)皮細(xì)胞凝血纖溶因子的分泌，rNF-α可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞TF及PAI-1的分泌，具有促凝作用。MODS患者表現(xiàn)為炎癥狀態(tài)，連續(xù)性血液凈化可有效清除TNF-α、IL-l β等細(xì)胞因子而減少其促凝作用，改善MODS患者的高凝狀態(tài)。 3．MODS患者血清可促進(jìn)人血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌TF、PAI-1，CBP治療可減輕內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，降低內(nèi)皮細(xì)胞TF、PAI-1的表達(dá)，改善患者的高凝狀態(tài)，與CBP有效清除細(xì)胞因子，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能