脫氧核酶DZ1影響鼻咽癌血管生成增強(qiáng)放療敏感性的機(jī)制研究.pdf

1、HIF-1是低氧應(yīng)答的中心分子，同時(shí)腫瘤中的多種上游基因通過氧依賴或非氧依賴的機(jī)制誘導(dǎo)表達(dá)HIF-1，進(jìn)而調(diào)節(jié)HIF-1的相應(yīng)靶基因編碼蛋白參與調(diào)控腫瘤的多種生物學(xué)效應(yīng)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是HIF-1的重要靶分子之一，同時(shí)也是調(diào)節(jié)腫瘤血管生成的關(guān)鍵分子，腫瘤血管生成與放射抵抗之間存在密切的關(guān)系，提示HIF-1可能通過影響腫瘤血管生成參與腫瘤細(xì)胞的放療抵抗。臨床資料顯示放射治療是鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NP

2、C)的首選治療方式，放療抵抗是臨床復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要原因。研究表明鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展與EB病毒密切相關(guān)，作為EB病毒編碼的致瘤蛋白，LMP1在其中發(fā)揮著重要作用，提示LMP1可以作為鼻咽癌靶向干預(yù)的重要靶基因。脫氧核酶是利用體外分子進(jìn)化技術(shù)獲得的一種具有催化功能的短片段單鏈DNA，是一種高效特異的基因靶向治療的新策略，在前期工作中，我們已發(fā)現(xiàn)靶向LMP1的脫氧核酶DZ1能夠增強(qiáng)鼻咽癌的放療敏感性，但其具體作用機(jī)制仍不清楚。本研究中，我們首先利

3、用微血管內(nèi)皮細(xì)胞小管形成實(shí)驗(yàn)明確脫氧核酶DZ1能夠抑制腫瘤細(xì)胞中VEGF的分泌，并影響血管生成。進(jìn)一步通過多種小分子抑制劑，利用熒光素酶雙報(bào)告基因以及Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LMP1主要通過JNK/HIF-1通路影響VEGF的表達(dá)，而脫氧核酶DZ1能夠通過抑制JNK/HIF-1，下調(diào)VEGF表達(dá)。我們對(duì)15例鼻咽癌臨床病理樣本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，初步確定了LMP1與JNK、HIF-1、VEGF表達(dá)正相關(guān)。隨后檢測(cè)經(jīng)脫氧核酶處理的鼻

4、咽癌細(xì)胞的平板集落形成能力，證實(shí)脫氧核酶DZ1能夠增強(qiáng)LMP1陽性細(xì)胞的放療敏感性。通過建立裸鼠移植瘤模型，運(yùn)用生物學(xué)發(fā)光成像技術(shù)實(shí)時(shí)觀察脫氧核酶DZ1對(duì)裸鼠移植瘤放療敏感性的影響;并利用磁共振灌注成像技術(shù)檢測(cè)裸鼠移植瘤腫瘤組織微血管滲透性，在體內(nèi)水平證實(shí)了脫氧核酶DZ1能夠抑制腫瘤血管生成，從而影響腫瘤細(xì)胞的放療敏感性。最后通過對(duì)動(dòng)物腫瘤組織進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)，證明脫氧核酶能夠在體內(nèi)抑制VEGF的表達(dá)。
　　綜上，通過本研究，我們