水曲柳體細(xì)胞胚成熟及萌發(fā)促進(jìn)研究.pdf

1、水曲柳（Fraxinus mandshurica Rupr.）屬木犀科白蠟樹屬，是我國(guó)東北地區(qū)重要的珍貴闊葉樹種。水曲柳體細(xì)胞胚發(fā)生及植株再生的研究對(duì)水曲柳優(yōu)良無(wú)性系的大量快繁具有重要的意義。許多研究者提出，在再生系統(tǒng)中體細(xì)胞胚的成熟是十分重要的一環(huán)，在本研究組前期研究中發(fā)現(xiàn)，在誘導(dǎo)出的體胚發(fā)育到子葉形體胚時(shí)，體胚大多數(shù)是畸形的（如多子葉胚、單子葉胚、聯(lián)體胚等），并伴隨繼代時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸褐化死亡。因此，體細(xì)胞胚的質(zhì)量和形態(tài)的好壞直接影

2、響到體細(xì)胞胚的萌發(fā)和植株再生。
　　本文針對(duì)水曲柳體細(xì)胞胚低萌發(fā)率和低成苗率的現(xiàn)象，通過(guò)對(duì)體胚分化階段到成熟發(fā)育這階段及體胚后期萌發(fā)發(fā)育階段的關(guān)鍵影響因素進(jìn)行調(diào)控來(lái)提高體胚的成活率和萌發(fā)率，同時(shí)采用掃描電鏡和透射電鏡觀察方法來(lái)跟蹤觀察水曲柳體胚發(fā)生過(guò)程的細(xì)胞變化，通過(guò)研究外植體細(xì)胞表面及內(nèi)部物質(zhì)變化，給今后為建立水曲柳體胚發(fā)生及植株再生系統(tǒng)提供可靠的理論依據(jù)。
　　(1)以分化階段體胚期體胚（球形、心形、魚雷形）為材料，選擇

3、MS1/2+1.5mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-16-BA+400 mg·L-1水解酪蛋白+70 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂為對(duì)照，在添加不同滲透劑對(duì)體胚進(jìn)行成熟培養(yǎng)（此階段包括分化階段和成熟培養(yǎng)）中，結(jié)果表明添加蔗糖70 g·L-1、活性炭2 g·L-1和PEG30 g·L-1，對(duì)體胚成熟明顯具有促進(jìn)作用，其中PEG30 g·L-1處理后的體胚雖然成熟率不如添加其它滲透劑成熟率高，但都為正常的成熟胚。
　　(2

4、)在分化階段在培養(yǎng)基中添加ABA、NAA和6-BA，添加低濃度的細(xì)胞分裂素更有利于體胚成熟。在GA3其中添加5.0 mg·L-1的赤霉素中有70％體胚向成熟方向發(fā)育。
　　(3)在電鏡觀察過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)接種外植體表面有單細(xì)胞突起，隨之出現(xiàn)了早期的體細(xì)胞胚同時(shí)細(xì)胞組成細(xì)胞團(tuán)，組成細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞之間結(jié)合緊密，而細(xì)胞團(tuán)與細(xì)胞團(tuán)之間結(jié)合疏松，中間具有一定的空隙。進(jìn)一步進(jìn)行內(nèi)部觀察，在外植體培養(yǎng)階段細(xì)胞發(fā)生一系列的變化。這些都可以說(shuō)明胚性細(xì)胞處

5、于十分活躍的狀態(tài)為進(jìn)一步分裂儲(chǔ)備了豐富的能量和物質(zhì)，這也為下一步進(jìn)行研究提供了依據(jù)。
　　(4)選擇子葉形體胚進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，以MS1/2+0.01 mg·L-1NAA+20 g·L-1蔗糖+200mg·L-1水解酪蛋白+6.5 g·L-1瓊脂培養(yǎng)基為對(duì)照，在研究發(fā)現(xiàn)活性炭能有明顯的促進(jìn)體胚的萌發(fā)（達(dá)到83.3％）的作用，其真葉發(fā)育正常且部分長(zhǎng)出胚根，以單獨(dú)添加0.2 mg·L-16-BA的培養(yǎng)基對(duì)體胚的萌發(fā)效果最好，萌發(fā)率達(dá)到了6