葛根丹參藥對有效成分提取分離及其膠囊制劑的研究.pdf

1、本課題針對臨床發(fā)病率高的冠心病心絞痛疾病,選擇“北京四大名醫(yī)”之一施今墨治療冠心病心絞痛證屬血脈瘀滯者的經(jīng)驗藥對葛根與丹參為研究對象,根據(jù)其理化性質(zhì)和臨床需求,將其制備成口服膠囊的劑型。
　　 施今墨,中醫(yī)臨床家,教育家。畢生致力于中醫(yī)事業(yè)的發(fā)展。提倡中西醫(yī)結(jié)合,培養(yǎng)了許多中醫(yī)人才。長期從事中醫(yī)臨床,治愈了許多疑難重癥,創(chuàng)制了許多新成藥,獻(xiàn)出700個驗方。為中醫(yī)事業(yè)做出突出貢獻(xiàn),在國內(nèi)外享有很高的聲望。葛根丹參藥對源于《施今墨藥

2、對》。其意在活血化瘀,祛瘀生新,用于冠心病心絞痛血脈瘀滯者。方中葛根輕揚升發(fā)、解肌退熱、生津止渴、滋潤筋脈,擴張腦、心血管,改善血液循環(huán)；丹參活血祛淤,化瘀生新、涼血消癰、鎮(zhèn)靜安神。二藥合用,相互促進(jìn),活血化瘀。
　　 因此,本實驗首先從葛根丹參復(fù)方合煎液的化學(xué)成分提取分離入手,從中得到9個單體化合物:丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、二氫丹參酮、刺芒炳花素、大豆苷元、葛根素、大豆苷、丹酚酸B,并通過UV、MS、1H—NMR、13

3、C—NMR等分析方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。并建立了采用近紅外光譜儀同時定量分析其中3種代表性成分的模型,肯定了近紅外是簡單、迅速、不破壞樣品、能同時定量分析多種成分的一種新的方法。之后根據(jù)文獻(xiàn)擬定葛根素、丹參酮、丹酚酸B的含量為整個實驗的考察指標(biāo),建立了葛根丹參有效成分高效液相色譜含量測定方法,對葛根素、丹參酮、丹酚酸B3種化合物的含量進(jìn)行跟蹤測定。通過正交實驗優(yōu)化了葛根丹參復(fù)方合提的提取工藝,并對大孔吸附樹脂純化工藝進(jìn)行了系統(tǒng)研究。接著本實驗

4、對葛根丹參膠囊的成型工藝進(jìn)行了研究,并初步制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。
　　 我們在對該藥對的化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上,將其開發(fā)為治療冠心病心絞痛的國家中藥六類新藥一葛根丹參膠囊。本專題對主要分為四部分:一是葛根丹參藥對中化學(xué)成分的研究；二是近紅外對葛根丹參藥對多種有效成分進(jìn)行同時定量分析的探討；三是葛根丹參有效成分質(zhì)量控制研究；四是葛根丹參膠囊制劑的研究。
　　 1.葛根丹參合煎液的提取分離
　　 為了對葛根丹參藥對進(jìn)行質(zhì)

5、量控制和新藥開發(fā)奠定物質(zhì)基礎(chǔ),首先運用多種柱層析法對藥對葛根丹參合煎液的化學(xué)成分進(jìn)行了進(jìn)一步的系統(tǒng)分離研究。從合煎液中共分離獲得了10個化合物,用波譜學(xué)方法(UV、NMR、MS),輔以理化常數(shù)、對照品,鑒定了其中9個單體化合物:丹參酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹參酮Ⅰ(TanshinoneI)、隱丹參酮(Cryptotanshinone)、二氫丹參酮Ⅰ(DihydrotanshinoneⅠ)、刺芒柄花素(Formononetin

6、)、大豆苷元(Daidzein)、葛根素(Puerarin)、大豆苷(Daidzin)、丹酚酸B(Tanshinol B)。接下來我們根據(jù)文獻(xiàn)用葛根素、丹參酮ⅡA和丹參酸B三種成分對葛根丹參藥對進(jìn)行質(zhì)量控制,為全面控制其脂溶性成分和水溶性成份作了基礎(chǔ)研究。
　　 2.近紅外同時定量葛根丹參有效成分分析的探討
　　 近紅外光譜技術(shù)是近年來發(fā)展迅速的一種綠色分析技術(shù),已經(jīng)在農(nóng)業(yè)、食品、石化等領(lǐng)域中得到了成功的應(yīng)用,以其快速方

7、便、適應(yīng)在線分析和無損分析的特點,在藥物分析中已經(jīng)得到了重視和應(yīng)用,各種不同用途的分析儀器和計算機軟件都不斷地設(shè)計出來。
　　 針對中藥復(fù)方化學(xué)成份的復(fù)雜性,選擇典型藥對葛根丹參,就近紅外光譜技術(shù)在中藥復(fù)方提取物質(zhì)量控制和過程分析中的應(yīng)用進(jìn)行初步的探討。以其對應(yīng)的近紅外光譜為標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)集,采用近紅外光譜技術(shù)偏最小二乘回歸法建立定量校正模型分析有效成分的含量。研究證明近紅外技術(shù)與傳統(tǒng)的分析方法相比,具有方便、快速、無損的特點,能夠同

8、時定量分析中藥復(fù)方制劑中多種有效成分。
　　 3.葛根丹參有效成分質(zhì)量控制研究
　　 以有效成分葛根素、丹參酮ⅡA及丹酚酸B為考察指標(biāo),通過正交試驗優(yōu)化了葛根丹參的提取方法為:葛根丹參粉末混合后采用75％乙醇回流提取3次每次1h；通過實驗考察提取液濃縮至0.2g生藥/ml時,丹參酮ⅡA97.3％都轉(zhuǎn)移至沉淀中,再經(jīng)過離心把提取液分為兩部分,脂溶性成分經(jīng)水洗至Molishi反應(yīng)為陰性,水溶性成分經(jīng)優(yōu)選過的大孔樹脂D101-

9、A純化,精制后的兩部分再過400目篩混合均勻。經(jīng)HPLC方法測定,暫定葛根丹參純化后浸膏粉葛根素、丹參酮ⅡA及丹酚酸B的含量分別不低于10％、1％及11％。
　　 4.葛根丹參膠囊制劑的研究
　　 根據(jù)葛根丹參浸膏粉的理化性質(zhì),將其制成膠囊劑型,并對葛根丹參膠囊進(jìn)行了質(zhì)量控制。采用TLC法鑒別了制劑中的葛根和丹參,結(jié)果表明薄層色譜斑點清晰,特征性強,重現(xiàn)性好,隱性無干擾,適用于葛根丹參膠囊的定性鑒別。
　　 采用

10、HPLC法測定了制劑中葛根素、丹參酮ⅡA和丹酚酸B三種成分。實驗結(jié)果表明,液相色譜的線性、精密度、重現(xiàn)性、加樣回收率均良好,并制定了其含量限度。規(guī)定本品每粒膠囊含葛根以葛根素計,不得少于35mg；含丹參以丹參酮ⅡA和丹酚酸B計,分別不得少于6mg,40mg。
　　 本課題采用常溫試驗和加速試驗分別對制劑的定性鑒別、含量測定、性狀外觀、裝量差異、水分測定、崩解時限項進(jìn)行了3個月的考察,結(jié)果均無明顯變化,表明本品在考察其內(nèi)穩(wěn)定,穩(wěn)定