前扣帶回皮質(zhì)ERK1-2的活化對乙酸誘導(dǎo)小鼠急性內(nèi)臟痛相關(guān)焦慮樣行為的作用.pdf

1、目的：探討在乙酸誘導(dǎo)的急性內(nèi)臟痛模型中，小鼠前扣帶回皮質(zhì)(ACC)內(nèi)磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表達的時空變化及可能作用。
　　方法：本研究采用正常的成年雌性昆明小鼠作為研究對象。實驗組小鼠腹腔注射0.6％的乙酸(10ml/kg)建立急性內(nèi)臟痛模型，對照組小鼠腹腔注射等量生理鹽水。實驗以腹壁收縮次數(shù)為指標(biāo)觀察動物的內(nèi)臟痛反應(yīng)。采用免疫組織化學(xué)和Western Blot檢測小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2表達的時程變化，免疫熒

2、光雙標(biāo)法檢測p-ERK1/2在GABA能神經(jīng)元的表達情況。為了探討ERK1/2的活化對乙酸誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)臟疼痛及痛相關(guān)的焦慮樣行為的影響，在注射乙酸30分鐘前皮下給予小鼠MEK的抑制劑SL327(30mg/kg)抑制ERK1/2的磷酸化，然后檢測小鼠的痛反應(yīng)及痛相關(guān)的焦慮樣行為。
　　結(jié)果：腹腔注射乙酸后小鼠前扣帶回皮質(zhì)區(qū)p-ERK1/2呈雙相性增高表達:腹腔注射0.6％的乙酸后1小時內(nèi)小鼠的腹壁收縮次數(shù)明顯高于對照組(p＜0.00

3、01)，說明0.6％的乙酸能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生急性內(nèi)臟痛反應(yīng)。免疫組織化學(xué)和Western Blot結(jié)果均顯示乙酸注射后小鼠ACC內(nèi)ERK1/2被快速的激活（磷酸化），而且p-ERK1/2的表達具有雙相性。在乙酸注射后10 min時小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的表達明顯上調(diào)，p-ERK1/2的免疫陽性細胞數(shù)明顯高于正常對照組(p＜0.001)，而在乙酸注射30min時小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的表達降低，恢復(fù)至對照組水平(p＞0.05)，但

4、在乙酸注射1hr時小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的表達又有明顯增強，與對照組相比陽性細胞數(shù)明顯增多(p＜0.05)，而在乙酸注射2hr時小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的陽性細胞數(shù)又恢復(fù)至基礎(chǔ)水平(p＞0.05)。同時，Western Blot結(jié)果還顯示小鼠ACC內(nèi)總ERK1/2在各時間點的表達實驗組與對照組相比沒有明顯的差異(p＞0.05)。
　　注射乙酸10 min時小鼠前扣帶回皮質(zhì)內(nèi)p-ERK1/2與GAD沒有明顯的共表達:免疫組

5、織化學(xué)和Western Blot結(jié)果均顯示在乙酸注射10 min時小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的表達達到峰值，為了檢測此時ACC內(nèi)p-ERK1/2在何種細胞類型中表達，我們采用免疫熒光雙標(biāo)法檢測了p-ERK1/2與GAD67（GABA能神經(jīng)元標(biāo)記物）的共表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ACC內(nèi)p-ERK1/2與GAD67沒有明顯的共存。
　　皮下注射MEK的抑制劑SL327不能有效減輕乙酸誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)臟疼痛反應(yīng)，但能有效緩解小鼠痛相關(guān)的焦慮樣行

6、為:小鼠皮下給予SL327(30mg/kg)或同劑量的DMSO（SL327的溶劑），30分鐘后再向兩組小鼠腹腔給予0.6％的乙酸。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示乙酸注射10 min時實驗組（SL327組）小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的免疫陽性細胞數(shù)與對照組（DMSO組）相比明顯減少(p＜0.001)，說明SL327皮下注射能明顯抑制乙酸誘導(dǎo)的小鼠ACC內(nèi)ERK1/2的激活。兩組小鼠在乙酸注射后1小時內(nèi)的腹壁收縮次數(shù)的結(jié)果顯示實驗組小鼠的腹壁收縮次

7、數(shù)與對照組相比差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05);高架十字迷宮結(jié)果顯示乙酸注射2小時后SL327組小鼠在開放臂停留的時間百分比明顯高于對照組，差異具有顯著性(p＜0.001)，曠場結(jié)果顯示乙酸注射2小時后SL327組小鼠在中央格停留的時間百分比明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論：腹腔乙酸注射能明顯誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生內(nèi)臟痛反應(yīng)，在此過程中小鼠ACC內(nèi)p-ERK1/2的表達呈雙相性升高，而且ERK1/2的活化不