基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1對兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、研究目的：
　　觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）對兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外增殖的影響，探討SDF-1在軟骨細(xì)胞凋亡過程中的作用。
　　研究方法：
　　體外分離培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，給予不同濃度(0、1、10、25、50、75、100ng/ml)SDF-1處理24h，同時各濃度組設(shè)立平行對照，采用5μg/mlAMD3100與之共培養(yǎng)，采用噻唑藍(lán)（MTT）比色法和測定細(xì)胞周期觀察各組軟骨細(xì)胞增殖。凋亡方面，將軟骨細(xì)胞隨機(jī)

2、分為四組：對照組、50ng/mlSDF-1組、50ng/mlSDF-1+5μg/mlAMD3100作用組、5μg/mlAMD3100處理組，將各組置于250μmol/L過氧化氫條件下作用2h，錐蟲藍(lán)染色計數(shù)軟骨細(xì)胞存活率；測定各組中半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶（Caspase-3）的活力；流式細(xì)胞儀觀察各組軟骨細(xì)胞凋亡率的變化；原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL法）檢測凋亡的軟骨細(xì)胞。
　　結(jié)果：
　　增殖實驗中50ng/ml

3、SDF-1組吸光度值（0.502±0.017）均高于其它各濃度組，且該組G0/G1期細(xì)胞比例較少，S+(G2/M)期細(xì)胞比例高于其它各組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p﹤0.05）；但與AMD3100共培養(yǎng)后，這一差異表現(xiàn)的不明顯。在凋亡方面，錐蟲藍(lán)拒染實驗結(jié)果顯示SDF-1組中細(xì)胞存活率高于其他三組（p<0.01）；而SDF-1組膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素（AnnexinV-FITC）標(biāo)記(+)的細(xì)胞比例（4.0±0.92）％低于其他各組（p﹤

4、0.05）；SDF-1組Caspase-3活力（40.03±2.56）nmolpNA/（h?mg）蛋白也較其他三組低（p<0.01）；TUNEL實驗中SDF-1組細(xì)胞核呈棕黃色的軟骨細(xì)胞數(shù)低于其他各組（p﹤0.05），但各實驗中SDF-1+AMD3100組和AMD3100處理組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　　SDF-1在一定濃度范圍內(nèi)可促進(jìn)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外增殖，且在50ng/ml時軟骨細(xì)