從樹突狀細(xì)胞Toll信號傳導(dǎo)通路探討肝癌發(fā)生的分子機(jī)制.pdf

1、從樹突狀細(xì)胞Toll信號傳導(dǎo)通路探討肝癌發(fā)生的分子機(jī)制博士研究生導(dǎo)師董薇蔡美英教授本課題受高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(0040105102006)資助二OO四年十二月●●●董薇博士學(xué)位論文：從樹突狀細(xì)胞Tol1信號傳導(dǎo)通路探討肝癌發(fā)生的分子機(jī)制2[結(jié)果]采用GM—CSFIL一4誘導(dǎo)外周血單核細(xì)胞的方法，可平均從lOOml健康人外周血中獲得96X106個(gè)成熟DC。誘導(dǎo)出的90％以上Dc表達(dá)DC特異性標(biāo)志CDla，而單核細(xì)胞標(biāo)志CDl4

2、仍未消失，達(dá)322％，CD86(712％)，CD40(726％)，CD83(728％)，HLA—DR(693％)，HLAABC(679％)，CD54(660％)，C080(762％)是未成熟DC(imDC)。經(jīng)LPS誘導(dǎo)24h后，除CDl4外，Dc的表面標(biāo)志表達(dá)增高，CD83(935％)，CD86(964％)，CD40(889％)，HLA—DR(929％)，CD54(975％)，HLA—ABC(99O％)，CD80(876％)是成熟Dc

3、(mDC)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，DC的成熟程度不同，內(nèi)吞能力也隨之改變，培養(yǎng)的第3天達(dá)高峰，以后明顯下降。加入LPS誘導(dǎo)24h后，內(nèi)吞能力有所下降。少量DC即可強(qiáng)烈激發(fā)T淋巴細(xì)胞的增殖，并隨著Dc濃度增加而刺激作用逐漸增強(qiáng)，加入LPS誘導(dǎo)24h后，Dc的刺激能力略有增強(qiáng)。DC在不同的培養(yǎng)時(shí)期分泌的IL一12水平不一，在第7天時(shí)水平最高。LPS刺激后IL—12水平略有增高。正常DC培養(yǎng)上清中基本沒有TNF—d的表達(dá)，LPS刺激后有TNF—

4、d的分泌。LPS誘導(dǎo)后MLR中IFNY分泌增加。imOC中有TLR2、TLR3、TLR4的表達(dá)，其中以TLR3表達(dá)最強(qiáng)。LPS刺激24h后，mDC中TLR2、3、4表達(dá)顯著下降。imDC中熒光主要聚集在胞漿部位，胞核為陰性，mDC的細(xì)胞核染色陽性。HCC患者外周血來源的DC，在形態(tài)上和正常DC無差別，有明顯的根須狀突起，其表面分子標(biāo)志HLA—DR明顯低于正常，即使LPS刺激后表達(dá)也較低，HCCDC的CDl4表達(dá)非常低，幾乎檢測不到。其余

5、標(biāo)志都低于正常DC，LPS刺激后稍有升高。但是HCCDC的吞噬能力卻高于正常DC。分泌的IL一12、TNF—a、IFN—Y均比正常值低，刺激T細(xì)胞增殖的能力也弱于正常OC，LPS刺激后各細(xì)胞因子的分泌、刺激能力有所增加，但仍低于正常值。在HCCDC的TLRs信號途徑中，TLR2、3、4mRNA水平明顯低于正常值。LPS誘導(dǎo)后TLR2、3、4mRNA水平進(jìn)一步降低。HCCDC的熒光主要位于胞漿部位，但熒光強(qiáng)度弱于正常imOC，LPS刺激后

6、，熒光移位至核內(nèi)，胞漿及胞核均為弱陽性。[結(jié)論]聯(lián)合應(yīng)用GM—CSFIL4可以將健康人外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)為DC，但經(jīng)功能學(xué)分析，該DC是imDC，LPS刺激24h后，DC進(jìn)一步分化成熟。LPS是DC的一種促成熟因子。imDC上CDl4表達(dá)并未消失，其TLR2、3、4mRNA水平比較高，LPS刺激后C014表達(dá)下降，TLR2、3、4基因水平也顯著下降。說明CDl4及YhRs參與LPS信號傳導(dǎo)。ImDC上熒光主要位于胞漿，LPS刺激后，胞核