沙眼衣原體臨床株的分離培養(yǎng)及PCR-RFLP基因分型研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlaydia trachomatis，Ct)是目前國內(nèi)外最常見的性病病原體之一，也是非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的主要病原體。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，每年有9300萬新發(fā)病例，給社會造成嚴重的經(jīng)濟負擔。泌尿生殖道Ct感染的發(fā)病率在我國有逐年增加的趨勢，已成為危害公共健康的一大問題。泌尿生殖道的Ct感染可引起多種疾病，除引起非淋菌性尿道炎外，還可引起多種并發(fā)癥。目前認為Ct的致

2、病性與其不同型別有關，至今已發(fā)現(xiàn)19種Ct血清型。常用的Ct分型方法有血清學分型和基因分型兩種，其中血清分型繁瑣、耗時，且需培養(yǎng)傳代獲得高濃度的抗原，限制了其廣泛應用；基因分型能在較短時間內(nèi)獲得相應結(jié)果而取代血清分型，成為目前Ct分型的主要方法。Ct的基因分型是檢測特定型別的流行動態(tài)、臨床判定治療與再感染、流行病學調(diào)查等各方面研究的基礎，同時對建立Ct不同基因型與不同臨床過程的關系、推斷來源、判斷預后等都有著重要作用。此外，Ct基因分型

3、多以主要外膜蛋白基因(即ompl基因)為基礎，因而能夠為ompl遺傳變異機制的研究提供有益信息，從而有利于Ct疫苗的研制。 目的：通過培養(yǎng)法和PCR法分離得到Ct臨床株，以PCR-RFLP法對獲得的臨床標本進行基因分型，了解本地區(qū)性病門診Ct的基因型分布，并探索其臨床過程與基因型的關系。在Ct E型標準株培養(yǎng)的基礎上，建立一套適應于我所實驗室的成熟可行的Ct臨床株培養(yǎng)篩查方法，保留Ct臨床株，為進一步深入研究奠定基礎。

4、方法：收集了2005年4月～2005年12月期間到天津市性傳播疾病研究所門診就診患者的尿道或?qū)m頸拭子213例，所有患者均符合采集標準，并記錄其臨床相關資料。在Ct E型標準株培養(yǎng)的基礎上行臨床標本的細胞培養(yǎng)，對陽性標本行PCR擴增出ompl基因。同時用質(zhì)粒PCR篩選陽性臨床標本，PCR擴增得到ompl基因。用AluⅠ和Msp Ⅰ內(nèi)切酶酶切ompl基因，10％聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳后與各型Ct標準株理論酶切后的結(jié)果比較得出分型結(jié)果，并總結(jié)

5、Ct型別與患者臨床過程和特點的相關性。 結(jié)果：首先培養(yǎng)臨床標本共得到27例陽性臨床株，同時用質(zhì)粒引物擴增臨床標本，陽性標本再經(jīng)PCR擴增得到ompl基因，共得到33例陽性臨床株可用于RFLP基因分型。經(jīng)分型共檢出5個基因型，其中E型25例、F型2例、D型1例、G型3例、J型2例。比較E型與其它各型在不同年齡段的分布上有統(tǒng)計學上的顯著差異，而在性別、病程、有無非婚性接觸、學歷等各方面無統(tǒng)計學上的顯著差異。 結(jié)論：