皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因甲基化的研究.pdf

1、目的:研究皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化與其基因表達的關系，探討RUNX3基因甲基化在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)病機制中的作用。 方法:采用半定量PCR(RT-PCR)檢測人惡性黑色素瘤細胞株A375中的RUNX3基因mRNA轉錄水平、甲基化特異性多聚酶鏈反應(MSP)檢測其啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)、Western Blot檢測其蛋白表達情況；比較經不同濃度去甲基化藥物5-雜氮胞苷(5-azac)(0μmol

2、/l，1μmol/l，5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l)處理A375細胞后，RUNX3基因mRNA的表達水平、啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)及蛋白表達情況的差異，并用MTT法觀察5-雜氮胞苷對細胞增殖的影響。 結果:在人惡性黑色素瘤細胞株A375中，去甲基化藥物5-雜氮胞苷處理前，RUNX3基因表達缺失，處于失活狀態(tài)，且該基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)。但經不同濃度5-雜氮胞苷處理細胞后，失活的RUNX3基因得以重新