清風(fēng)膠囊和電擊對(duì)CPP大鼠條件性線索相關(guān)成癮記憶的影響.pdf

1、背景 阿片類物質(zhì)依賴是一種慢性、復(fù)發(fā)性腦病，對(duì)機(jī)體損害較大，其濫用所帶來(lái)的公共衛(wèi)生和社會(huì)問(wèn)題日漸突出。復(fù)吸行為是阿片類物質(zhì)依賴狀態(tài)的重要特征，也是治療藥物成癮的關(guān)鍵所在。越來(lái)越多的證據(jù)表明，復(fù)吸的主要原因是成癮記憶的長(zhǎng)期存在。 鞏固是短時(shí)記憶變?yōu)殚L(zhǎng)時(shí)記憶的過(guò)程，大量的研究表明鞏固時(shí)需要蛋白質(zhì)的合成。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，依賴蛋白合成的記憶一旦形成永久存在，并對(duì)蛋白合成抑制劑和其它能干擾記憶的處理不敏感。但是，最近研究顯示，長(zhǎng)時(shí)記

2、憶因重現(xiàn)而被激活時(shí)，會(huì)再次對(duì)干擾敏感，且需要新蛋白質(zhì)的合成，即重新鞏固。 目的 根據(jù)神經(jīng)心理學(xué)和傳統(tǒng)心理療法的相關(guān)知識(shí)，借鑒記憶重新鞏固理論和方法的研究成果，試著運(yùn)用條件性位置偏愛(ài)(CPP)模型，用藥物和行為兩種方法，改變CPP大鼠的行為，并通過(guò)對(duì)CPP大鼠復(fù)吸相關(guān)腦區(qū)葡萄糖代謝水平的研究，探索條件性線索(CS)相關(guān)成癮記憶改變的可能性。 方法 1．藥物治療研究：24只成年雌性wistar大鼠，隨機(jī)分成3

3、組(每組8只)，分別為CPP模型組、藥物治療組和正常對(duì)照組。開始訓(xùn)練前測(cè)試各組大鼠CPP值。CPP模型組和藥物治療組的大鼠，接受CPP訓(xùn)練：上午經(jīng)皮下注射給予嗎啡后，放入到白箱1h；下午給予生理鹽水后放到黑箱1h。連續(xù)訓(xùn)練6d(d3-d8)。正常對(duì)照組中用生理鹽水代替嗎啡，其它處理同CPP模型組。d9，測(cè)量各組大鼠的CPP值。藥物治療組的大鼠，在d10至d15，每天上午給予清風(fēng)膠囊一次。然后在d16、d21、d26測(cè)定各組大鼠的CPP值

4、。2．電擊治療研究：24只成年雌性Wistar大鼠，隨機(jī)分成3組(每組8只)，分別為CPP模型組、電擊治療組和正常對(duì)照組。開始訓(xùn)練前測(cè)試各組大鼠CPP值。CPP模型組、電擊治療組的大鼠，接受CPP訓(xùn)練，連續(xù)訓(xùn)練6d(d3-d8)。正常對(duì)照組中用生理鹽水代替嗎啡，其它處理同CPP模型組。d9，測(cè)量各組大鼠的CPP值。電擊治療組的大鼠d10給予電擊(100v，25mA，1s)處理一次，d16、d21、d26測(cè)定各組大鼠的CPF值。

5、3．糖代謝研究：18只成年雌性Wistar大鼠，隨機(jī)分成6組，分別為CPP模型組、電擊對(duì)照組、電擊治療組、空白對(duì)照組、藥物治療組和正常對(duì)照組，每組3只。CPP模型組、電擊治療組、藥物治療組及正常對(duì)照組的大鼠，處理同上面藥物治療和電擊治療研究。電擊對(duì)照組在d10，給予電擊(100v，25mA，1s)處理一次?？瞻讓?duì)照組在此期間內(nèi)不做任何處理。d26，各組大鼠禁食8h，CPP模型組、電擊對(duì)照組、電擊治療組、藥物治療組和正常對(duì)照組的大鼠，尾靜

6、脈注射給予2-NBDG(0.125mg/只)后，放入白箱中30分鐘。取出，水合氯醛麻醉后，取完整的腦，液氮中速凍，冰凍切片機(jī)上10um切片(空白對(duì)照組不給2-NBDG，直接麻醉，取腦，切片)，柯達(dá)2000MM成像系統(tǒng)下熒光成像。尾狀核(CPu)、伏核(NAc)、隔核(SPN)、扣帶回(CG)、海馬(CA)、杏仁核(AMG)和中腦腹側(cè)背蓋區(qū)(VTA)作為分析區(qū)域(AOI)，進(jìn)行圖像分析，得到各個(gè)AOI的平均灰度值(MAOI)和該AOI所在

7、圖像的平均灰度值(MTOTAL)。 4．統(tǒng)計(jì)方法：統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS13.0，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)CPP數(shù)據(jù)，進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析，并對(duì)各個(gè)試驗(yàn)組的數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析，最后對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行one-way ANOVA分析，多重比較均采用LSD法。圖象數(shù)據(jù)以(MAOI-MTOTAL)/MTOTAL作為統(tǒng)計(jì)變量，首先進(jìn)行2因素析因設(shè)計(jì)的方差分析，然后對(duì)各個(gè)腦區(qū)的數(shù)據(jù)進(jìn)行one-way ANOVA分析，多重比較采用

8、LSD法。結(jié)果1．藥物治療CPP行為學(xué)各組不同時(shí)間之間均有顯著差異(F=5.872，238.689，58.301:P=0.001，0.000，0.000)。正常對(duì)照組的CPP值整體上呈增加趨勢(shì)，與d2相比，d21及d26時(shí)CPP值的增加均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022，0.001)。CPP模型組d9時(shí)最高，然后呈減小趨勢(shì)，與d9相比，d21和d26時(shí)CPP值的減小均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012，0.001)，但d9、d16、d21、d26

9、時(shí)均顯著大于d2(P均為0.000)。藥物治療組的CPP值d9達(dá)到高峰，與d9時(shí)相比，d16、d21、d26時(shí)的減小均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均為0.000)，其中d26與d2之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.141)。 2．電擊治療CPP行為學(xué)各組不同時(shí)間之間均有顯著差異(F=5.872，238.689，58.301；P=0.001，0.000，0.000)。正常對(duì)照組的CPP值整體上呈增加趨勢(shì)，與d2相比，d21及d26時(shí)CPP值的

10、增加均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022，0.001)。CPP模型組d9時(shí)最高，然后呈減小趨勢(shì)，與d9相比，d21和d26時(shí)CPP值的減小均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012，0.001)，但d9、d16、d21、d26時(shí)均顯著大于d2(P均為0.000)。電擊治療組的CPP值d9達(dá)到高峰，與d9時(shí)相比，d16、d21及d26時(shí)的減小均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均為0.000)，但d16、d21、d26之間呈增加趨勢(shì)，在d26時(shí)最大，且與造模前即d2之間的差

11、異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.291)。 NAc：CPP模型組的相對(duì)熒光強(qiáng)度顯著高于正常對(duì)照組(P=0.023)，而電擊對(duì)照組、電擊治療組、空白對(duì)照組、藥物治療組的相對(duì)熒光強(qiáng)度與正常對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異(P=0.212，0.145，0.194，0.845)。電擊治療組、藥物治療組與CPP模型組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.037)。 SPN： CPP模型組的相對(duì)熒光強(qiáng)度顯著高于正常對(duì)照組(P=0.004)

12、，而電擊對(duì)照組、電擊治療組、空白對(duì)照組、藥物治療組4個(gè)組與正常對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異(P=0.960，0.468，0.478，0.517)。電擊治療組、藥物治療組與CPP模型組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.001)。 CG： CPP模型組、電擊對(duì)照組、藥物治療組的相對(duì)熒光強(qiáng)度均顯著高于正常對(duì)照組(P=0.018，0.004，0.001)，而電擊治療組、空白對(duì)照組這2個(gè)組與正常對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異(P=0.7

13、34，0.920)；藥物治療組和CPP模型組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.331)，而電擊治療組和CPP模型組之間有顯著性差異(p=0.040)。 CA： CPP模型組、電擊對(duì)照組、電擊治療組、空白對(duì)照組的相對(duì)熒光強(qiáng)度與正常對(duì)照組之間均有顯著性差異(P=0.000，0.028，0.011，0.000)，但是藥物治療組與正常對(duì)照組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.524)；電擊治療組、藥物治療組與CPP模型組相比差異均有統(tǒng)

14、計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.000)。 AMG： CPP模型組、電擊對(duì)照組的相對(duì)熒光強(qiáng)度均顯著低于正常對(duì)照組(P=0.000，0.047)，而電擊治療組、空白對(duì)照組、藥物治療組這3個(gè)組與正常對(duì)照組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.292，0.206，0.377)。電擊治療組、藥物治療組的相對(duì)熒光強(qiáng)度與CPP模型組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000，0.001)。 VTA： CPP模型組、空白對(duì)照組的相對(duì)熒光強(qiáng)度與正常

15、對(duì)照組之間均有顯著性差異(P=0.012，0.000)，而電擊對(duì)照組、電擊治療組、藥物治療組這3個(gè)組與正常對(duì)照組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.271，0.702，0.954)；電擊治療組、藥物治療組與CPP模型組相比均有顯著性差異(p=0.004，0.010)。 結(jié)論 1．正常大鼠對(duì)白箱的厭惡隨時(shí)間而呈降低的趨勢(shì)，并且這種降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．經(jīng)過(guò)六天的傾向性訓(xùn)練后，模型大鼠對(duì)白箱表現(xiàn)出明顯的偏愛(ài)，說(shuō)明CP

16、P模型制作成功。模型大鼠在未經(jīng)治療處理的情況下，18天內(nèi)CPP值有所減小，但仍表現(xiàn)出顯著的條件位置偏愛(ài)。 3．CPP模型大鼠經(jīng)過(guò)清風(fēng)膠囊和電擊治療，大鼠CPP的表達(dá)均受到抑制，并在停止治療后的一段時(shí)間內(nèi)，這種抑制作用一直存在。 4．糖代謝分析結(jié)果顯示，CPP模型大鼠在未經(jīng)任何治療的情況下，d26呈現(xiàn)CS時(shí)，與正常大鼠相比，CPu、NAc、SPN、CG、CA以及VTA區(qū)域的糖代謝顯著增加，而AMG區(qū)域的糖代謝卻顯著降低，均

17、表現(xiàn)為糖代謝異常。經(jīng)過(guò)電擊治療后，CPu、NAc、SPN、CA、CG和VTA區(qū)域的糖代謝顯著降低，而AMG的糖代謝卻顯著升高，即所有腦區(qū)的糖代謝異常情況均得到了改善；與正常對(duì)照組大鼠相比，除CA外的其余6個(gè)腦區(qū)的糖代謝恢復(fù)到正常水平。經(jīng)清風(fēng)膠囊治療后，CPu、NAc、SPN、CA和VTA區(qū)域的糖代謝顯著降低，AMG的糖代謝顯著升高，除CG外的所有腦區(qū)糖代謝異常情況均得到了改善；與正常對(duì)照組大鼠相比，除CG外的其余6個(gè)腦區(qū)的糖代謝均恢復(fù)到