GSK3β和p38MAPK在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3，GSK3β）是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與凋亡，微管動(dòng)力學(xué)及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和血管生成。致瘤轉(zhuǎn)錄因子和癌蛋白作為GSK3β底物，由GSK3β磷酸化失活，抑制GSK3β的活性及表達(dá)誘導(dǎo)EMT，表明GSK3β在腫瘤發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。p38MAPK是Mitogen Activated Protein Kinase（MAPK）家族的重要成員在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、腫瘤侵襲

2、轉(zhuǎn)移方面具有重要的調(diào)控功能。GSK3β位點(diǎn)的磷酸化狀態(tài)調(diào)節(jié)GSK3β的活性，在N端絲氨酸9（Ser9）處磷酸化可降低GSK3β活性。GSK3β與p38MAPK存在一定關(guān)系，新近研究發(fā)現(xiàn)在鼠F9畸胎癌細(xì)胞，p38MAPK可以通過(guò)使GSK3β的N端絲氨酸9（Ser9）處磷酸化失活調(diào)節(jié)經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路。在胸腺和腦組織中p38MAPK可以通過(guò)直接磷酸化GSK3β的C端使其滅活，而且這一行為能導(dǎo)致β-catenin的聚集，這些表明GSK3β可

3、能受p38MAPK的調(diào)控。
　　 有關(guān)GSK3β在乳腺癌體外的研究較多，抑制GSK3β的活性抑制乳腺癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)wnt信號(hào)通路的活化，提示GSK3β的失活促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)展，但關(guān)于它在乳腺癌組織中的表達(dá)研究鮮見(jiàn)報(bào)道，p38MAPK可能磷酸化GSK3β促進(jìn)其失活。本文研究p-GSK3β，p-p38和總的OSK3β在乳腺癌組織中的表達(dá)及和臨床病理因素的關(guān)系，明確GSK3β在乳腺癌組織中表達(dá)的意義。
　　 材料和

4、方法：
　　 1、材料
　　 （1）臨床資料80例乳腺癌組織蠟塊取自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院病理科，為2005年～2008年手術(shù)切除標(biāo)本。依據(jù)WHO2003年所推薦的乳腺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，80例均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。收集50例外科手術(shù)切除新鮮乳腺組織標(biāo)本，標(biāo)本取出后立即置-70℃冰凍保存。其中30例為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，20例為乳腺纖維腺瘤。
　　 （2）主要試劑 兔抗人p-GSK3β-ser9多克隆抗體（sc

5、-11757-R）購(gòu)自Santa Cruz公司，鼠抗人p-p38單克隆抗體（＃9216）購(gòu)自Cell Signaling公司，兔抗人GSK3β（BS1402）多克隆抗體購(gòu)自Bioworld Technology公司。S-P超敏免疫組化試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。
　　 2、方法
　　 （1）免疫組織化學(xué)（S-P）法采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶法（S-P法）。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照

6、，用已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。
　　 （2）Western Blot取新鮮樣品（約3mm3）加裂解液，剪碎，勻漿超聲處理，高速低溫離心提取上清蛋白，電泳，轉(zhuǎn)印，經(jīng)封閉后加相應(yīng)的一抗、二抗及顯色試劑檢測(cè)。圖像掃描，測(cè)定p-GSK3β、p-p38蛋白的灰度值。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 采用SPSS for windows11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、>　　 結(jié)果：
　　 1、p-GSK3β、p-p38和GSK3β蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及其同臨床病理因素的關(guān)系
　　 （1）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，p-GSK3β蛋白主要位于乳腺癌細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒，陽(yáng)性率為67.5％（54/80）。p-p38蛋白主要位于乳腺癌細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色顆粒，陽(yáng)性率為60.0％（48/80）。p-GSK3β和p-p38蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者年齡和腫瘤大小沒(méi)有關(guān)系，p

8、-GSK3β蛋白與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（0.019）。56％的乳腺癌組織中GSK3β蛋白胞質(zhì)表達(dá)消失，32.5％乳腺癌組織發(fā)現(xiàn)GSK3β蛋白核表達(dá)，胞核表達(dá)的GSK3β蛋白和乳腺癌的臨床分期及ER表達(dá)有關(guān)。
　　 （2）Western Blot結(jié)果表明p-GSK3β和p-p38兩種蛋白含量在乳腺癌組織與纖維腺瘤中的差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、乳腺癌組織中p-p38和p-GSK3β蛋白表達(dá)相關(guān)性分析
　　 p-

9、p38表達(dá)陽(yáng)性的48例乳腺癌組織中p-GSK3β表達(dá)陽(yáng)性者36例；p-p38表達(dá)陰性的32例乳腺癌組織中p-GSK3β表達(dá)陰性者14例。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示p-p38和p-GSK3β兩者之間表達(dá)存在正相關(guān)（r=0.316，P<0.05）。
　　 討論：
　　 GSK3β抑制Wnt通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡，在腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用，體外研究表明在乳腺癌細(xì)胞系激活GSK3β促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Marganit Farago等通過(guò)基因修

10、飾的方式抑制乳腺癌細(xì)胞系中GSK3β的活性，發(fā)現(xiàn)Wnt通路異常激活，促進(jìn)乳腺腫瘤的發(fā)生。抑制GSK3β的活性誘導(dǎo)EMT，因此GSK3β失活可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。GSK3β在乳腺癌中的研究大多集中在體外，它在乳腺組織中的表達(dá)少見(jiàn)，我們選擇失活的9位點(diǎn)磷酸化的GSK3β做研究發(fā)現(xiàn)p-GSK3β在乳腺癌組織中高表達(dá)，這與在肝癌和肺癌中的研究結(jié)果相一致，高表達(dá)的p-GSK3β與乳腺癌臨床分期正相關(guān)，提示p-GSK3β促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。Wester

11、n Blot的結(jié)果也支持p-GSK3β在乳腺癌中表達(dá)高于纖維腺瘤?？偟腉SK3β在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)，也提示乳腺癌中GSK3β的活性是受到抑制的。
　　 新的一些研究表明p38MAPK和GSK3β存在關(guān)聯(lián)。在鼠胚胎癌中研究發(fā)現(xiàn)p38可以通過(guò)使GSK3β的N端絲氨酸9（Ser9）處磷酸化失活促進(jìn)β-catenin在腫瘤細(xì)胞核中聚集。p-p38可能作為p-GSK3β的上游因子調(diào)節(jié)其表達(dá)，我們的研究表明p-p38和p-GSK3β在乳腺癌

12、組織中表達(dá)呈正相關(guān)，提示p38MAPK可能通過(guò)失活GSK3β促進(jìn)腫瘤發(fā)展。
　　 p38MAPK可能做為GSK3β的上游因子，上調(diào)p-GSK3β的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)GSK3β調(diào)節(jié)的下游相關(guān)因子導(dǎo)致乳腺癌的惡性進(jìn)展。p38MAPK信號(hào)通路抑制GSK3β的表達(dá)，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為p38MAPK信號(hào)通路作為乳腺癌治療的靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　 結(jié)論：
　　 1、p-GSK3β和p-p38蛋白與乳腺癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)