炎癥性腸病的腸黏膜免疫調(diào)控機(jī)制及黃芪多糖治療作用的探討.pdf

1、研究背景：
　　 炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種病因未明的慢性復(fù)發(fā)性免疫性腸道疾病,迄今無根治方法,近年來在我國發(fā)病率呈明顯上升。腸道黏膜異常免疫應(yīng)答啟動(dòng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)樹突狀細(xì)胞(dendriltic cells,DCs)及其下游的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和,Th17細(xì)胞比例失衡可能在IBD中發(fā)揮了重要作用。近年來,中醫(yī)基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)展迅速,在IBD治療方面取得了一定的臨床療效。黃

2、芪是最常用的幾種中藥之一,已有研究發(fā)現(xiàn)黃芪提取物可預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎,但關(guān)于其主要生物活性成份黃芪多糖(astragalus polysaccarides,APS)對結(jié)腸炎的治療效果及確切作用機(jī)制目前尚無研究報(bào)道。
　　 研究目的：
　　 探討2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的腸黏膜免疫調(diào)控機(jī)制及APS的治療作用。
　　 研究方法：
　　 1.建立TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型:3

3、2只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=8),空白對照組、TNBS模型組、APS治療組、5-氨基水楊酸(5-ASA)治療組。除空白對照組外,其余3組均給予TNBS灌腸造模。造模后第二天,APS治療組和5-ASA治療組大鼠分別給予APS(0.75 g·kg-1·d-1)和5-ASA(100 mg·kg-1·d-1)灌胃治療10天。每天觀察大鼠體重、腹瀉及血便情況,給藥結(jié)束后處死大鼠取材。
　　 2.療效評價(jià):觀察結(jié)腸大體標(biāo)本及鏡下病理標(biāo)

4、本炎癥情況,測定腸道組織髓過氧化物酶(MPO)活性。
　　 3.免疫機(jī)制研究:免疫磁珠法分離大鼠腸系膜淋巴結(jié)(mesenteric lymph nodes,MLNs)中的DCs,流式細(xì)胞儀檢測DCs表面標(biāo)志MHCⅡ、CD86的表達(dá)。采用免疫組化和免疫印跡檢測腸道組織中Treg及Th17特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3和RORγ的表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1.TNBS模型組大鼠結(jié)腸大體病變、鏡下病理炎癥評分及MPO活

5、性均顯著高于空白對照組(P=0.004)。APS治療可顯著減輕結(jié)腸大體及鏡下炎癥評分,降低MPO活性,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(JP=0.183)。5-ASA治療組大鼠的大體、鏡下炎癥病變評分以及MPO活性均較模型組顯著下降。
　　 2.TNBS組大鼠腸系膜淋巴結(jié)DCs表面標(biāo)志MHCⅡ和CD86的表達(dá)率較空白對照組、APS組及5-ASA組顯著升高(P<0.05)。APS及5-ASA治療后MHCⅡ和CD86的表達(dá)率較TNBS模型組大鼠顯著降

6、低(P<0.05)。
　　 3.免疫組化顯示TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸道Foxp3的表達(dá)較正常大鼠有所降低(P=0.424),RORγ顯著升高(P=0.027)。APS及5-ASA干預(yù)可升高大鼠腸道Foxp3的表達(dá),降低RORγ的表達(dá)。
　　 4.免疫印跡顯示TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸道Foxp3的表達(dá)較正常大鼠顯著降低,RORγ較正常大鼠顯著升高,Foxp3/RORγ/的比值較正常大鼠顯著降低(P=0.001)。APS

7、治療組大鼠腸道Foxp3表達(dá)較TNBS模型組有所升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.072),RORγ的表達(dá)較 TNBS造模大鼠顯著降低(P=0.014),Foxp3/RORγ的比值有所升高((P=0.111)。5-ASA治療組大鼠腸道Foxp3的表達(dá)較TNBS模型組有所升高,RORγ的表達(dá)有所降低,Foxp3/RORγ的比值有所升高,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)小結(jié)：
　　 1.APS(0.75 g·k

8、g-1·d-1)灌胃治療10天可部分緩解TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎。5-ASA的療效略優(yōu)于APS。
　　 2.TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸道DCs表面標(biāo)志MHCⅡ和CD86的表達(dá)率升高,APS和5-ASA治療后,其表達(dá)率均降低。
　　 3.TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸道Foxp3/RORγ的比值顯著降低。APS和5-ASA可通過對Foxp3、RORγ的調(diào)控作用,升高Foxp3/RORγ比值,有助于恢復(fù)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸道Tre