肺炎克雷伯氏菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)及其耐藥性分析研究.pdf

1、目的：了解本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)情況及ESBLs基因型分布；分析產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯氏菌耐藥性及耐藥特點(diǎn)。 方法：1.紙片擴(kuò)散法(Kerby-Bauer法，K-B法)：采用美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)推薦的K-B法，檢測(cè)79株肺炎克雷伯氏菌對(duì)15種抗生素的耐藥性。 2.初步篩選試驗(yàn)(screeningtest)：選用頭孢噻肟、頭孢他啶、氨曲南、頭孢曲松、頭孢泊肟藥敏紙片，凡

2、頭孢泊肟或頭孢他啶的抑菌環(huán)直徑≤22mm,頭孢曲松≤25mm,氨曲南或頭孢噻肟≤27mm，提示這些菌株為可疑ESBLs產(chǎn)生株，進(jìn)一步作確認(rèn)試驗(yàn)。 3.紙片確認(rèn)試驗(yàn)(confirmatorytest)：將初篩可疑產(chǎn)ESBLs菌株同時(shí)用頭孢他啶和頭孢他啶加克拉維酸，頭孢噻肟和頭孢噻肟加克拉維酸作藥敏試驗(yàn)，對(duì)任何一組藥物，加克拉維酸比不加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑≥5mm可確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。上述三種試驗(yàn)均用肺炎克雷伯氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATC

3、C700603作質(zhì)控。 4.PCR：檢測(cè)確認(rèn)試驗(yàn)陽(yáng)性的菌株攜帶的ESBLs基因型。根據(jù)blaTEM-3及blaSHV-2的序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，采用UNIQ-10柱式質(zhì)粒小量抽提試劑盒提取質(zhì)粒DNA用于PCR反應(yīng)模板。各標(biāo)本分別使用兩對(duì)設(shè)計(jì)好的引物擴(kuò)增blaTEM及blaSHV，陽(yáng)性擴(kuò)增片段長(zhǎng)度分別為867bp和547bp。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，紫外線檢測(cè)儀觀察結(jié)果并照相。 結(jié)果：1.受檢的79株肺炎克雷伯氏菌對(duì)15種抗生素

4、的藥敏結(jié)果顯示，對(duì)氨芐西林的耐藥率最高，為86.08％；哌拉西林、頭孢唑啉次之，耐藥率分別是58.23％、54.43％；對(duì)頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢泊肟、氨曲南、環(huán)丙沙星的耐藥率分別是40.51％、37.97％、36.71％、34.18％、31.65％；對(duì)氨芐西林/舒巴坦、阿米卡星的耐藥率分別是22.78％、20.25％；對(duì)頭孢他啶，頭孢吡肟的耐藥率分別為15.19％、13.92％；對(duì)頭孢西丁、哌拉西林/三唑巴坦的耐藥率為3.80％；所有

5、菌株對(duì)亞胺培南敏感，耐藥率為0。 2.初篩結(jié)果有50株可疑產(chǎn)ESBLs菌株，進(jìn)一步經(jīng)紙片確認(rèn)試驗(yàn)有28株產(chǎn)ESBLs，占總數(shù)的35.4％。頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸組檢出28株產(chǎn)ESBLs菌株，而用頭孢他啶與頭孢他啶/克拉維酸組檢出16株產(chǎn)ESBLs菌株，二者相比有顯著差異(x2檢驗(yàn)，P＜0.01)。 3.產(chǎn)ESBLs與非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯氏菌株對(duì)亞胺培南全部敏感；產(chǎn)ESBLs菌對(duì)哌拉西林/三唑巴坦、頭孢西丁的耐藥

6、率都為7.14％，與非產(chǎn)ESBLs的細(xì)菌相比無(wú)差異(x2檢驗(yàn)，P＞0.05)；對(duì)頭孢吡肟、頭孢他啶的耐藥率32.14％，與非產(chǎn)ESBLs的細(xì)菌相比有差異(x2檢驗(yàn)，0.01＜P＜0.05)；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)氨芐西林/舒巴坦的耐藥率是53.57％，對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率是57.14％，二者與非產(chǎn)ESBLs的菌株相比有顯著差異(x2檢驗(yàn)，P＜0.01)；對(duì)氨曲南，頭孢泊肟的耐藥率分別為85.71％，89.29％，與非產(chǎn)ESBLs的菌株相比有顯

7、著差異(x2檢驗(yàn)，P＜0.01);產(chǎn)ESBLs對(duì)頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢唑啉、哌拉西林高度耐藥，耐藥率為96.43％，與非產(chǎn)ESBLs細(xì)菌相比有顯著差異(x2檢驗(yàn)，P＜0.01)；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)氨芐西林全部耐藥，非產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)氨芐西林耐藥率為78.43％，二者相比無(wú)差異(x2檢驗(yàn)，P＞0.05)。42.8％的產(chǎn)ESBLs菌株同時(shí)對(duì)環(huán)丙沙星和阿米卡星耐藥，4.3％的非產(chǎn)ESBLs菌株同時(shí)對(duì)這兩種藥物耐藥，二者相比有顯著差異(x2

8、檢驗(yàn)，P＜0.01)。4.28株產(chǎn)ESBLs菌株的PCR擴(kuò)增結(jié)果為T(mén)EM型為4株(14.3％)，SHV型為5株(17.9％)；非TEM型，非SHV型占67.8％。 結(jié)論：1.本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌對(duì)青霉素類(lèi)抗生素耐藥率很高，對(duì)大部分頭孢菌素類(lèi)、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素以及環(huán)丙沙星存在不同程度的較高耐藥，對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、氨芐西林/舒巴坦、阿米卡星的耐藥率較低，對(duì)頭孢西丁、哌拉西林/三唑巴坦的耐藥率很低，對(duì)碳青霉烯類(lèi)高度敏感。

9、 2.本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌產(chǎn)ESBLs菌株流行嚴(yán)重。 3.產(chǎn)ESBLs細(xì)菌對(duì)常用抗生素的體外抗菌活性明顯高于非產(chǎn)ESBLs細(xì)菌，對(duì)青霉素類(lèi)、大部分第三代頭孢菌素類(lèi)抗生素耐藥率很高，對(duì)喹諾酮類(lèi)及氨基糖苷類(lèi)耐藥率也較高；相當(dāng)部分對(duì)第四代頭孢菌素敏感，大部分對(duì)頭霉素類(lèi)，β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑敏感；對(duì)碳青霉烯類(lèi)高度敏感。 4.本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌攜帶的ESBLs部分為T(mén)EM型和SHV型，非SHV非TEM型可能為其它型ES